Análisis estructural de esporas de carbón del maní - Diaz, M. S. (2022)
El carbón del maní es una enfermedad endémica, causada por el hongo Thecaphora frezii, que produce importantes pérdidas económicas en el cultivo. Sus teliosporas sobreviven en el suelo, resultando infectivas entre campañas consecutivas. Hasta el momento no existe una caracterización estructural profunda de las mismas, lo cual resulta de sumo interés a la hora de visualizar estrategias de control. En el presente trabajo, analizamos la estructura de teliosporas mediante microscopía de campo claro (CC), fluorescencia (MF), microscopía electrónica de barrido (SEM) y microscopia electrónica de transmisión (TEM). Todas las observaciones se realizaron sobre un pool de esporas enteras y rotas por ruptura mecánica. Para microscopía de fluorescencia las esporas se tiñeron con calcofluor a fin de evaluar la naturaleza glucosídica de la pared; para SEM se realizó disecado de punto crítico y metalizado con oro. Para analizar la estructura interna de las esporas se utilizó TEM, para lo cual se fijaron e incluyeron en resina Spurr Low Viscocity. Luego se realizaron cortes ultra finos de aproximadamente 90 nm y se contrastaron con citrato de plomo ph 12 y acetato de uranilo 2%. Mediante microscopia de campo claro se pudo determinar que las teliosporas constan de varios glomérulos agrupados, de aproximadamente 50 µm, de aspecto rugoso pigmentado marrón. Mediante SEM pudimos apreciar que las teliosporas se componen de una ornamentación externa formada por varias capas de diferente grosor; la capa más externa conformada de superficie rugosa densa y por debajo una capa de fibras más laxa. En el interior se evidenció una endospora con fibras dispuestas longitudinalmente con un patrón muy similar a la quitina comercial. Cuando se tiñeron con calcofluor y se analizaron por microscopia de fluorescencia, se encontró fluorescencia azul en las endosporas, lo que corrobora la presencia de glucósidos en la pared. Las esporas enteras no muestran fluorescencia azul, lo que sugiere que no sería la celulosa el componente principal de pared externa. En las imágenes obtenidas por TEM, los primeros cortes mostraron las esporas completamente vacías por lo cual se realizaron nuevos cortes con muestras pretratadas con HCI 2N 10 min y 2 hs para mejorar la entrada del fijador. En los cortes se visualizó la ornamentación externa y la distribución de las distintas capas. Si bien muchos glomérulos se encontraron vacíos, en algunos pudo identificarse el citoplasma de color gris claro. Sin embargo, no se precisó en estos cortes presencia de núcleo discreto, mitocondrias ni retículo endoplásmico. En algunas teliosporas se detectaron ribosomas agrupados en zonas periféricas o el citoplasma lleno de vacuolas. Las teliosporas de T. frezii representan las estructuras de resistencia del hongo, en las que pudo observarse una conformación exterior ornamentada y una estructura interior compuesta por una pared glucosídica. Si bien un alto porcentaje de esporas se vieron vacías en los cortes ultrafinos, muchas presentaron un citoplasma electrodenso, donde difícilmente pueden distinguirse algunas organelas. Se deben continuar los estudios para identificar la ultraestructura celular de estas esporas, sin embargo este trabajo representa la primera descripción de las estructuras de resistencia del hongo T. frezii y su conocimiento resulta un importante aporte para diseñar estrategias de manejo del mismo.