Estudio de la interacción del metabolismo del nitrógeno y del carbono en micobacterias - Bulssico, Julián Agustín (2018)
En el presente trabajo de tesina, se llevó a cabo la caracterización del regulador transcripcional putativo NlpR, codificado por el gen MSMEG_0432 de Mycobacterium smegmatis. Con este objetivo, se construyó una cepa mutante (M. smegmatis ΔnlpR) que posee una deleción de 1023 pares de bases en MSMEG_0432 mediante intercambio alélico por recombinación homóloga. El análisis del fenotipo de crecimiento de la cepa M. smegmatis ΔnlpR, en comparación con la cepa salvaje, demostró que la misma es incapaz de crecer utilizando nitrato de potasio o nitrito de sodio como fuentes exclusivas de nitrógeno; mientras que, al utilizar cloruro de amonio el crecimiento de la cepa mutante y salvaje fueron similares. A su vez, la complementación de la mutación con un alelo salvaje de MSMEG_0432 a través de un vector integrativo y bajo un promotor inducible por el agregado de anhidrotetraciclina (ATc) permitió restaurar el crecimiento con nitrato de potasio y nitrito de sodio como única fuente de nitrógeno a niveles comparables con la cepa salvaje. Estudios previos, realizados en los genes ortólogos a MSMEG_0432 en Rhodococcus jostii RHA1, sugirieron que dicho gen actuaría como un regulador transcripcional pleiotrópico, mediando la interacción del metabolismo de nitrógeno y carbono en respuesta a la carencia de fuentes de nitrógeno en el medio externo. Sin embargo, en el presente estudio no pudo comprobarse la influencia de MSMEG_0432 en genes relacionados al metabolismo del carbono. Las cromatografías en capa delgada (TLC) no mostraron variaciones tanto en la acumulación como en la síntesis de novo de TAG en las cepas mutante y salvaje. Asimismo, la sobreexpresión de dicho gen en una cepa salvaje no mostró un cambio significativo en la síntesis de lípidos neutros.