Análisis de las vías Wnt/β-catenina y TGF-β/Smads en líneas de hepatocarcinoma humano : efectos del Interferón-2b - Ceballos Mancini, María Paula (2013)
La vía Wnt/β-catenina está frecuentemente activada en el hepatocarcinoma celular (HCC). β-catenina activa se acumula en el citosol y en el núcleo, donde promueve la proliferación celular uniéndose a los factores LEF/TCF, entre ellos TCF4. El factor de crecimiento transformante beta 1 (TGF-β1) participa en los procesos de arresto celular y apoptosis y actúa a través de las proteínas Smads. Una forma de interacción entre las vías Wnt/β-catenina y TGF-β1/Smads es mediante la asociación de Smads con el complejo nuclear TCF4/-catenina. Por otra parte, FoxO3a es miembro de la clase O de factores de transcripción forkhead box y está implicado en procesos tales como arresto celular y apoptosis. FoxO3a interactúa en el núcleo con β-catenina y con Smads para modular la transcripción génica. La señalización de FoxO3a es regulada negativamente por las quinasas Akt, IKKβ y Erk y positivamente por las quinasas JNK y p38. El interferón alfa (IFN-α) presenta propiedades antiproliferativas y proapoptóticas y se sugiere una potencial eficacia de la terapia con esta citoquina para el tratamiento del HCC. En este trabajo de tesis analizamos los efectos de IFN-2b y de TGF-β1 sobre la proliferación celular y la apoptosis y sobre la vía Wnt/β-catenina, los intermediarios Smads, el factor FoxO3a y su modulación por quinasas y la interacción entre estas señales, en las líneas de HCC HepG2/C3A y Huh7. La respuesta global de las células a los tratamientos con IFN-2b y con TGF-β1 fue la disminución de la proliferación y el incremento de la apoptosis. IFN-2b y TGF-β1 atenuaron la vía Wnt/β-catenina disminuyendo los niveles proteicos de β-catenina y del receptor de la vía Frizzled7 y la interacción entre β-catenina y TCF4. Los niveles de la forma truncada de β-catenina presente en HepG2/C3A también se redujeron luego de los tratamientos. Ambas citoquinas disminuyeron el contenido de las proteínas Smads y su asociación con TCF4. En conjunto, estos resultados indicarían la reducción de la formación de complejos Smads/TCF4/β-catenina en presencia de IFN-2b y de TGF-β1. El tratamiento con Wnt3a, que actúa como ligando de la vía Wnt/β-catenina, elevó los niveles de la proteína β-catenina y de los intermediarios Smads, indicando que la activación de vía Wnt/-catenina genera el incremento de los niveles proteicos de Smads. Por otro lado, el tratamiento con IFN-2b disminuyó los niveles proteicos de las formas activas de Akt, IKKβ y Erk e incrementó los niveles de las formas activas de JNK y p38. Adicionalmente, IFN-2b elevó los niveles nucleares de FoxO3a y este proceso estuvo mediado por la modulación de Akt, IKKβ, Erk y p38 por la citoquina. Al mismo tiempo, la estimulación de las células con IFN-2b incrementó la asociación de FoxO3a con -catenina y con Smads, lo cual implicaría un desplazamiento de - catenina y de Smads desde TCF4 hacia FoxO3a. Esto disminuiría la actividad transcripcional de TCF4 contribuyendo a la atenuación de la vía Wnt/-catenina causada por IFN-α2b y, además, aumentaría la actividad del factor de transcripción FoxO3a. En conclusión, las citoquinas IFN-2b y TGF-β1 mostraron ser efectivas como moduladores de la vía Wnt/β-catenina en líneas de HCC tanto en presencia de β-catenina salvaje como de su forma truncada. Adicionalmente, el desacoplamiento de los complejos Smads/TCF4/β-catenina contribuiría a contrarrestar la hepatocarcinogénesis, ya que la acción global de las citoquinas fue disminuir la proliferación celular y aumentar la apoptosis. El aumento nuclear de FoxO3a, su asociación con Smads y con β-catenina y la regulación de Akt, IKKβ, Erk, JNK y p38 mediada por IFN-2b, colaborarían en estos eventos. Así, estos hallazgos tendrían relevancia en el futuro diseño de estrategias terapéuticas para pacientes con HCC que dirijan las respuestas celulares hacia la supresión tumoral.