Production of Hesperetin Using a Covalently Multipoint Immobilized Diglycosidase from Acremonium sp. DSM24697

• Autores: Piñuel, María L.; Breccia, Javier D.; Guisán, José M.; López Gallego, Fernando
• Año de publicación: 2013
• Idioma: inglés
• Tipo de recurso: artículo
• Materia: Biotransformation; Biocatalysis; Hesperidin; Flavonoids; Citrus by-products
• Institución: Universidad Nacional de Río Negro

Fil: Piñuel, María L. Universidad Nacional de La Pampa. Facultad Ciencias Exactas y Naturales; Argentina
Fil: Breccia, Javier D. Universidad Nacional de La Pampa. Facultad Ciencias Exactas y Naturales; Argentina
Fil: Guisán, José M. Instituto de Catálisis y Petroleoquímica-CSIC, Departamento de Biocatálisis; España.
Fil: López Gallego, Fernando. Instituto de Catálisis y Petroleoquímica-CSIC, Departamento de Biocatálisis; España.
Fil: Piñuel, María L. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Ciencias de la Tierra y Ambientales de La Pampa; Argentina.
Fil: Breccia, Javier D. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Ciencias de la Tierra y Ambientales de La Pampa; Argentina.
The diglycosidase α-rhamnosyl-β-glucosidase (EC 3.2.1.168) from the fungus Acremonium sp. DSM24697 was immobilized on several agarose-based supports. Covalent multipoint immobilization onto glyoxyl-activated agarose was selected as the more stable preparation at high concentration of dimethyl sulfoxide (DMSO) and high temperature. The optimal conditions for the immobilization process involved an incubation of the enzyme with agarose beads containing 220 μmol of glyoxyl groups per gram at pH 10 and 25 ° C for 24 h. The hydrolysis of hesperidin carried out in 10% v/v DMSO at 60 ° C for 2 h reached 64.6% substrate conversion and a specific productivity of 2.40 mmol h –1 g –1 . Under these conditions, the process was performed reutilizing the catalyst for up to 18 cycles, maintaining >80% of the initial activity and a constant productivity 2.96 ± 0.42 μmol –1 h –1 g –1 . To the best of our knowledge, such productivity is the highest achieved for hesperetin production through an enzymatic approach.
La diglicosidasa α-ramnosil-β-glucosidasa (EC 3.2.1.168) del hongo Acremonium sp. DSM24697 fue inmovilizado en varios soportes a base de agarosa. Multipunto covalente se seleccionó la inmovilización en agarosa activada con glioxilo como la preparación más estable a alta concentración de dimetilsulfóxido (DMSO) y alta temperatura. Lo óptimo Las condiciones para el proceso de inmovilización implicaron una incubación de la enzima con perlas de agarosa que contienen 220 μmol de grupos glioxilo por gramo a pH 10 y 25 ° C para 24 h. La hidrólisis de hesperidina se realizó en 10% v/v DMSO a 60 ° C durante 2 h alcanzó el 64,6% de conversión de sustrato y una productividad específica de 2.40 mmol h –1 g –1. Bajo estas condiciones, el proceso se realizó reutilizando el catalizador por hasta 18 ciclos, manteniendo> 80% de la actividad inicial y una productividad constante 2.96 ± 0.42 μmol –1 h –1 g –1. A lo mejor de nuestro conocimiento, tal productividad es la más alta logrado para la producción de hesperetina a través de un enzimático.