Evaluación cinético-dinámica in vivo e in vitro en Haemochus contortus resistente a lactonas macrocíclicas - Lloberas, María Mercedes (2018)
La parasitosis gastrointestinal continúa siendo una de las principales causas de pérdidas económicas en la producción pecuaria y dentro de ella, la haemonchosis es sin duda la enfermedad más patógena y la que mayores pérdidas genera en la producción ovina. El control de las parasitosis debiera consistir en diversas estrategias de manejo de los animales y las pasturas junto con la administración de antihelmínticos, luego del diagnóstico parasitológico y terapéutico adecuado. Sin embargo, en las últimas tres décadas el control se basó casi exclusivamente en el utilización masiva de drogas antihelmínticas de amplio espectro cada vez más eficaces y persistentes. El incremento de la resistencia antihelmíntica junto con las nuevas tendencias de producción orgánica y disminución de los residuos de drogas en los alimentos generó interés en el estudio de nuevas estrategias de control. En este contexto el presente trabajo de Tesis Doctoral abordó la resistencia antihelmíntica desde un enfoque integrador fármaco-parasitológico, cuyo objetivo fue estudiar la relación que existe entre las concentraciones de diferentes lactonas macrocíclicas en plasma, tejidos/fluidos de localización parasitaria del ovino y en el parásito “blanco” y la eficacia sobre Haemonchus contortus resistente. Para ello se dividió la Tesis en 3 secciones experimentales. En la Primera se realizó la caracterización in vivo de factores que afectan la relación entre concentraciones en el sitio de localización parasitaria, concentraciones en el parásito “blanco” (H. contortus) y eficacia antihelmíntica para diferentes lactonas macrocíclicas en corderos infestados con parásitos resistentes y bajo condiciones estandarizadas. Dentro de esta sección se relizaron 3 experimentos en donde se comparó la utilización de dos vías de administración (subcubtánea e intraruminal), las diferentes lactonas macrocíclicas (ivermectina-abamectina-moxidectina) y la duplicación de la dosis como estrategias para aumentar la eficacia antihelmíntica. Se encontró que si bien la disposición plasmática es mayor al utilizar la vía subcutánea, las concentraciones son mayores en los tejidos y contenidos del tracto gastrointestinal a los 2-3 días post-tratamiento por vía intraruminal y esto produce un efecto relevante cuando se trata de nematodos resitentes, de tal forma que la eficacia contra H. contortus fue un 40 % mayor al utilizar la vía intraruminal, coincidentemente con las mayores concentraciones de ivermectina halladas dentro del parásito. Esto demuestra que la incorporación de la droga al parásito por vía transcuticular es relevante para la eficacia clínica, aún para aquellos parásitos que son hematófagos. En el segundo experimento se encontró que a la dosis terapéutica, moxidectina fue más efectiva frente a nematodos resistentes a ivermectina. Las concentraciones de los 3 fármacos encontradas en los tejidos del tracto gastrointestinal durante los primeros 2 días post tratamiento es relevante para su acción sobre los nematodos resistentes. Sin embargo, a pesar de que moxidectina obtuvo las menores concentraciones acumuladas en los parásitos adultos, el total de parásitos recuperados (al día 2) post tratamiento y su eficacia antihelmíntica fue mayor que la de ivermectina y abamectina. En el tercer experimento, donde se comparó la eficacia y la acumulación de fármacos en los tejidos de los corderos y en el H. contortus, utilizando ivermectina y moxidectina a la dosis terapéutica y al doble de la dosis terapéutica, debido al extremo grado de resistencia, sólo la administración de doble dosis de moxidectina fue efectiva. En la Sección Experimental II, se caracterizó in vitro la actividad de las lactonas macrocíclicas contra H. contortus resistente, mediante el desarrollo del test de inhibición de motilidad larval utilizando estadios larvarios de H. contortus. Esta prueba resultó ser una prueba eficaz para establecer diferencias entre aislamientos susceptibles de resistentes. Sin embargo, es una prueba difícil de implementar para el diagnóstico de resistencia de rutina. También se desarrolló un método ex vivo, para caracterizar el ingreso del fármaco dentro de los parasitos adultos. El incremento de la exposición a ivermectina y moxidectina se reflejan como un incremento en la cantidad de droga recuperada en los H. contortus. En la Sección Experimental III se estudiaron los cambios génicos en H. contortus asociados al fenómeno de resistencia. Se validó una metodología para cuantificar la expresión de glicoproteína-P2 en aislamientos de H. contortus susceptibles y resistentes a LMs. Se encontró una sobreexpresión en los aislamientos de parásitos resistentes. Además, el tratamiento con ivermectina, a diferencia de abamectina y moxidectina, fue el único que indujo un incremento significativo de la expresión de glicoproteína-P2 en los especímenes de H. contortus resistentes recuperados de corderos tratados a los 0,5 y 1 días post-tratamiento comparado con los H. contortus recuperados de animales sin tratamiento. Como conclusión, el presente trabajo de Tesis Doctoral a través de estudios in vivo, in vitro y utilizando herramientas de la biología molecular aporta información que es de utilidad para diseñar estrategias para prologar la vida útil de las lactonas macrocíclicas siempre que sean usados de manera racional y con una base de evaluación profesional por el veterinario.