Circulación y caracterización molecular de Rotavirus y Escherichia coli asociados a diarrea neonatal y septicemia en terneros - Louge Uriarte, Enrique Leopoldo (2016)
Rotavirus, coronavirus y Escherichia coli son causas frecuentes de diarrea y septicemia en terneros neonatos y producen importantes pérdidas económicas. Si bien en Argentina hay estudios de ambos virus, es necesario disponer de información epidemiológica actualizada. Por otra parte, en nuestro país hay escasa información con respecto a los atributos de virulencia de E. coli asociada a diarrea y septicemia en terneros. Esta información es importante para el desarrollo de nuevas vacunas. En la presente tesis se evaluó la circulación de rotavirus y coronavirus en terneros de la provincia de Buenos Aires y se analizaron los genotipos de rotavirus y las relaciones filogenéticas entre las cepas. También se evaluó la patogenicidad de rotavirus G6(III)P[11] y G10P[11] en terneros. En una segunda etapa se caracterizaron los genes de virulencia (GV) de E. coli en muestras de terneros de establecimientos de la provincia de Buenos Aires. Además, se describió la patología asociada a la septicemia por E. coli en terneros y se la relacionó con los perfiles genéticos de virulencia. El estudio de rotavirus y coronavirus incluyó 32 establecimientos (18 tambos y 14 campos de cría) distribuidos en 16 partidos de la provincia. Se recolectaron 422 muestras de materia fecal en terneros de tambo (diarrea, 137; sin diarrea, 103) y de cría para carne (diarrea, 104; sin diarrea, 78). La detección de ambos virus se realizó por ELISA y las muestras positivas a rotavirus fueron genotipificadas (tipos G y P). En una selección de cepas (tambo, 12; cría, 11) se realizó el análisis filogenético de VP7 y VP8*. Las secuencias deducidas de aminoácidos de ambas proteínas fueron comparadas con respecto a las cepas vacunales. Para el estudio de E. colise cultivaron 212 muestras de materia fecal. Las mismas se obtuvieron de terneros procedentes de 10 tambos (diarrea, 60; sin diarrea, 61) y 6 campos de cría (diarrea, 66; sin diarrea, 25), distribuidos en 9 partidos de la provincia. Las muestras de órganos y fluidos corporales (35) de terneros con septicemia (9) se analizaron por cultivo bacteriológico (26) e histopatología (22). Los aislamientos de E. coli(confluencia y colonias) se analizaron por PCR para detectar GV de E. coli enterotoxigénica (ETEC; sta, stb, eltA, f5y f41), E. coli verotoxigénica-enterohemorrágica (VTEC-EHEC;vtx1, vtx2, eaey Ehly), E. coli enteropatogénica (EPEC; eae y bfp), E. coli necrotoxigénica (NTEC; cnf1y cnf2) y E. coli septicémica (SePEC; f17G, papC, iucD, afa-8, clpG, cdtB y hlyA). En algunos aislamientos de E. coli asociados a septicemia y meningitis se evaluó la resistencia antimicrobiana. A partir del presente estudio se pudo demostrar que la circulación de rotavirus tuvo una amplia distribución en los tambos y campos de cría, mientras que la presencia de coronavirus quedó restringida a los establecimientos lecheros. La detección de rotavirus se asoció a la presencia de diarrea en ambos sistemas productivos y este virus es una causa importante de diarrea neonatal en nuestros rodeos. Las infecciones por rotavirus ocurrieron con mayor frecuencia en los terneros de cría y las infecciones por coronavirus fueron esporádicas. La frecuencia y diversidad de los genotipos G y P de rotavirus mostraron diferencias evidentes según el sistema productivo. En los terneros de cría existió un claro predominio de G6(IV)P[5], mientras que en los terneros de tambo prevalecieron G6(III)P[11] y las infecciones mixtas (diferentes tipos G y P). Los análisis filogenéticos mostraron una correspondencia completa con los resultados de la genotipificación realizada por RT-PCR semi-anidada y múltiple, confirmando la utilidad de esta técnica con fines epidemiológicos. El análisis filogenético de VP7 indicó una íntima relación entre la primera cepa bovina G8P[11] de Argentina y diferentes cepas G8 de cabra y camélidos sudamericanos de nuestro país. Las cepas G6(IV)P[5] mostraron una estrecha relación filogenética de acuerdo a la ubicación geográfica de los establecimientos de cría para carne y, además, algunas cepas G6(IV)P[5] de tambo revelaron nuevas características filogenéticas. Las cepas circulantes G6(IV)P[5] y G10P[11] mantuvieron conservadas sus regiones antigénicas de VP7 y VP8* con respecto a las cepas vacunales. En cuanto a E. coli, el patotipo ETEC no sería una causa frecuente de diarrea en la región, aunque no se descarta su circulación. Los aislamientos de E. coli con GV característicos del patotipo SePEC (tipo-ExPEC) predominaron en las heces de terneros de cría y tambo. No se pudo establecer una relación entre la presencia de diarrea y la detección de GV o genotipos correspondientes a SePEC, NTEC y EPEC. Sin embargo, algunos aislamientos de E. coli obtenidos de materia fecal mostraron genotipos de virulencia idénticos a los observados en aislamientos de órganos y fluidos corporales de terneros con septicemia. Por lo tanto, una proporción importante de los terneros excreta cepas de E. coli potencialmente patógenas en sus heces, incluso en animales coinfectados con rotavirus y coronavirus. El marcador genético de virulencia f17Gfue el más frecuente entre los aislamientos fecales de E. coli, independientemente de la condición clínica o el sistema productivo. Los aislamientos E. coli asociados a septicemia y meningitis presentaron perfiles genéticos de virulencia muy heterogéneos y el gen codificante para la aerobactina (iucD) fue el más importante.