Desarrollo de un reactivo para la detección de anticuerpos anti-Histoplasma Capsulatum, por aglutinación con partículas de látex - Leguizamón, Camila Daiana (2023)
El objetivo de este trabajo es estudiar los distintos componentes proteicos de la histoplasmina y la inmunoreactividad con diferentes antisueros homólogos y heterologos, y optimizar las condiciones para la preparación del reactivo de látex para así evaluar la especificidad y sensibilidad analítica. Cabe destacar que este trabajo aporto los primeros datos para lograr el desarrollo del reactivo para ser utilizado en el inmunodiagnóstico de histoplasmosis, el cual es un proyecto del Servicio Antígenos y Antisueros-INPB-ANLIS. Para la producción de este reactivo de látex, a partir de cultivos líquidos de Histoplasma capsulatum inactivados, se obtuvo la histoplasmina por técnicas de centrifugación, filtración, concentración y diálisis. Se cuantifico las proteínas por el método de Lowry y se caracterizaron por SDS-PAGE. Luego obtuvimos anticuerpos policlonales en conejo contra la histoplasmina mediante la inmunización de los mismos y se evaluó la reactividad mediante técnicas como inmunodifusion, dot blot, western blot y aglutinación con partículas de látex. Las partículas de látex de poliestireno de tamaño uniforme de 0.8 μm fueron sensibilizadas con la histoplasmina por adsorción pasiva. Para ello se emplearon diferentes concentraciones de la histoplasmina, 0.05, 0.02 y 0.01 mg/mg de látex y se ensayaron diferentes condiciones de pH, buffer glicina pH 8 y buffer acetato pH 4.8. Se eligió la mejor condición en cuanto a mayor eficiencia de adsorción y a mayor capacidad de aglutinación con antisueros homólogos y se evaluó las reacciones cruzadas con antisueros de conejo específicos a otras micosis (Coccidioides posadasii, Paracoccidioides sp., Aspergillus sp.). Por último, se comparó la aglutinación de látex con la inmunodifusión.