Expresión y función del factor de transcripción KLF6 en la placenta humana

• Autores: Racca, Ana Cristina
• Año de publicación: 2013
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Panzetta de Dutari, Graciela María Del Valle; Genti de Raimondi, Susana Del Valle; Nates, Silvia Viviana; Fretes, Ricardo Emilio; Cánepa, Eduardo
• Materia: Factores de transcripción; KLF6; Placenta humana; Trofoblastos
• Institución: Universidad Nacional de Córdoba

Tesis (Doctor en Ciencia Químicas) – Universidad Nacional de Córdoba, 2013.
Fil: Racca, Ana Cristina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentina.
La placenta es el órgano que establece relaciones críticas entre la madre y el feto. Su correcto desarrollo es indispensable para un embarazo exitoso y depende de interacciones coordinadas entre múltiples factores genéticos, epigenéticos y ambientales, mediadas en gran parte por los trofoblastos. Los citotrofoblastos vellosos (CTBv) fusionan dando lugar al sinciciotrofoblasto (STB) que cubre las vellosidades placentarias rodeadas por sangre materna. Los citotrofoblastos extravellosos (CTBev) adquieren un fenotipo invasivo y vascular anclando la placenta al útero materno y remodelando los vasos sanguíneos uterinos. Fallas en cualquiera de estos procesos de diferenciación o en la funcionalidad placentaria producen un espectro de patologías y complicaciones que afectan la salud materno-fetal. El Factor de transcripción KLF6 es miembro de la familia de Factores Tipo Krüppel, conservado evolutivamente y expresado de manera ubicua en mamíferos, tanto en tejidos adultos como embrionarios, restringiendo su mayor expresión a la placenta. Ratones knockout para klf6 mueren al día 12,5 de gestación por defectos en la vascularización del saco vitelino, en la hematopoyesis y el desarrollo de la placenta. Sin embargo, se desconocen los mecanismos que conducen a ese desarrollo anormal y en general se sabe muy poco sobre la función de KLF6 en el trofoblasto humano. En esta tesis se estudió la expresión y el rol de KLF6 en algunos de los eventos que ocurren durante el desarrollo de la placenta, principalmente la diferenciación del trofoblasto velloso. Se demostró que KLF6 se expresa en CTBv primarios, y a lo largo de su diferenciación espontánea in vitro, con una localización nuclear y citoplasmática. Presenta dos picos de expresión a nivel de transcripto y proteína. El primero entre las 2 y 4 horas de iniciada la diferenciación y el segundo, menos pronunciado, hacia el final del proceso. Similares resultados se obtuvieron en dos líneas celulares derivadas de coriocarcinoma cuando se las indujo a diferenciar: JEG-3 y BeWo. Se demostró expresión proteica de KLF6 en CTBev de primer trimestre inmortalizados: la línea celular HTR8/SVneo. Además, KLF6 se detectó en cortes histológicos de placentas a término en todos los tipos celulares CTBv, STB y CTBev. Durante la gestación, la hipoxia juega un rol fisiológico importante en etapas tempranas del embarazo, pero también en situaciones patológicas como la preeclampsia. Se demostró que la expresión proteica de KLF6 aumenta rápida y transitoriamente en hipoxia tanto en las células 1-1TR8/SVneo como en explantos de placentas normales a término, así como también en hipoxia se activó una construcción promotora de KLF6 con dos sitios consenso de unión para HIF-1. El incremento proteico de KLF6 en hipoxia resultó ser parcialmente dependiente del Factor Inducible por Hipoxia, HIE-la. El análisis histológico de placentas preeclámpticas y cretas reveló expresión diferencial de KLF6 en los CTBev, localizándose principalmente en citoplasma en contraste con los de placentas normales que presentan fuerte expresión nuclear. Los resultados obtenidos en esta tesis a partir del estudio de la función de KLF6, sugieren que éste participa en la iniciación de la diferenciación bioquímica activando la expresión endógena de PSG y PhCG, marcadores tempranos del proceso de diferenciación. En ensayos reporteros KLF6 indujo la actividad promotora de los genes CGB5, PSG5 y PSG3. Además, para el gen PSG5 se demostró que el dominio de dedos de zinc de KLF6, así como, el sitio CPE consenso para su unión al promotor son necesarios para la activación transcripcional, sugiriendo unión directa, lo cual se corroboró mediante ensayos de unión ADN-proteína in vitro. Así mismo, se determinó la participación de KLF6 en la diferenciación morfológica del trofoblasto velloso. Su sobreexpresión incrementó el nivel de transcriptos que codifican para proteínas involucradas directamente en este proceso, como: Sincitina-1, Sincitina-2, ZO-1 y Conexina-43. En conclusión, los resultados obtenidos permiten proponer a KLF6 como un regulador de genes claves para la diferenciación del trofoblasto, y sugieren que podría estar implicado en la fisiopatología de la preeclampsia.
Fil: Racca, Ana Cristina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentina.