Caracterización de la infección por el virus Epstein-Barr en pacientes portadores pediátricos sanos

• Autores: Vistarop, Aldana
• Año de publicación: 2019
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Campos, Rodolfo; Chabay, Paola Andrea; Flichman, Diego; Martínez Peralta, Liliana; Paglini, Gabriela
• Materia: Virus; EBU; Amigdala; Infección primaria; Pediátricos; Virus Epstein-barr; Ciencias de la vida
• Institución: Universidad de Buenos Aires

Fil: Vistarop, Aldana. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Buenos Aires, Argentina
El virus de Epstein-Barr (VEB) es un herpesvirus humano que infecta B y se mantiene silente a lo lardo de toda la vida, ocasionando, sólo en ciertos individuos el desarrollo de linfomas. Es un virus que afecta a más del 90% de la población mundial, quienes presentan serología de tipo IgG positiva.\nLa infección se desarrolla en forma diferencial en pacientes de países desarrollados en comparación con países en vías de desarrollo como Argentina. En el primer caso la infección primaria se manifiesta como Mononucleosis infecciosa (MNI), mientras que en el segundo caso en forma asintomática. En Argentina la mayoría de los niños son seropositivos a la edad de tres años y en dicha población se demostró además una asociación entre el EBV y el linfoma en niños menores de 10 años.\nSe han descripto dos modelos de infección del EBV, por un lado del modelo de centro germinal (CG), donde el virus accede a linfocitos B ?naive?, sigue el proceso de maduración de linfocitos B a lo largo de CG, hasta terminar formando parte de linfocitos B de memoria. Por otro lado el modelo de infección directa describe que el EBV accede en forma directa a linfocitos B de memoria sin experimentar el CG.\nDado que en Argentina la infección primaria es mayormente subclínica a edades tempranas, las amígdalas de los niños representan una población interesante donde analizar la infección por EBV, especialmente considerando que la mayoría de los estudios generalmente se realizan en sangre de pacientes adultos y en países desarrollados.\nEl objetivo fue caracterizar la infección por el EBV en pacientes pediátricos, para definir si la carga viral, el perfil de expresión de proteínas virales, el tipo de célula infectada y/o el microambiente son responsables de la presentación subclínica y/o de la potencial participación del virus en el desarrollo de linfomas.\nSe estudiaron 142 amígdalas de pacientes pediátricos de entre 1-15 años de edad. Se utilizó la técnica de inmunohistoquímica (IHQ) para detectar LMP1 con el fin de determinar el estatus de EBV, o la técnica de inmunofluorescencia indirecta para detectar, en un subgrupo de pacientes, IgM contra antígenos de la cápside viral (VCA). Del total de 92 pacientes, estudiados a través de la IHQ para LMP1 (76 evaluables), 69 casos resultaron positivos y fueron llamados ?pacientes infectados?, 7 casos fueron LMP1-, y en una etapa posterior del trabajo de tesis, se estudiaron 50 pacientes por serología y se seleccionaron 12 casos para caracterizar a los ?pacientes primoinfectados?, dada su serología positiva para IgM contra el antígeno VCA del EBV.\nSe realizó un Análisis cualitativo de las características virales mediante HIS, IHQ, qPCR-MCL para dianas, entre ellas, LMP1, LMP2A, EBNA2, 3A y 3C, BMRF1 y BHRF1; se estudió el tipo de célula infectada por medio de la doble marcación EBERs y ya sea, CD20, CD3, IgD o CD27, además de la carga viral por qPCR y del análisis por HIS para ARN virales utilizando sondas específicas. Dichos datos permitieron establecer las características cualitativas de la infección por EBV en pacientes pediátricos. Se realizó también un Análisis cuantitativo del microambiente inmunológico mediante IHQ para CD8, GzB, CD60, IL10, Foxp3, PD1, CD56, CD4. Finalmente, se compararon los datos obtenidos entre casos EBV+ vs EBV- y entre ?pacientes infectados? vs ?pacientes primoinfectados?.\nObservamos expresión de antígenos a lo largo de todas las regiones de la amígdala: subepitelial (SE), CG, interfolicular (IF) y en el epitelio. Se observó marcación de antígenos virales en los linfocitos SE de niños con bajas edades, lo que probablemente indica una infección reciente. En pacientes mayores, el EBV se detectó principalmente en las células epiteliales, lo que sugiere que podrían haberse infectado hace algún tiempo. Además los ?pacientes primoinfectados? presentan llamativamente el perfil de latencia LI y LII, mientras que los ?pacientes infectados? son los que presentan el perfil LII o la clásica expresión de antígenos asociada a MNI (LIII). La falta de síntomas clínicos probablemente se deba a la baja carga viral, a la baja expresión de antígenos, y a la respuesta inmunológica local en el sitio de ingreso del virus al organismo. Los modelos e infección no son mutuamente excluyentes en nuestra población, ya que se observa la infección por el EBV en linfocitos B ?naive? preferentemente localizados en la región IF, pero el perfil LII asociada a NO CG y LIII asociada a CG, con prevalencia de las proteínas LMP1 y LMP2A en la región que se encuentra fuera del CG (No CG).\nEl incremento de las poblaciones CD8, GrB y CD68 en la región SE podría indicar una respuesta específica en el sitio de entrada del virus al organismo, que podría contrarrestarse con la citoquina inmunosupresora como IL10.\nEn relación con desarrollo de linfomas, la respuesta sostenida de CD4 en CG de amígdalas de pacientes pediátricos, se pierde en pacientes con linfomas derivados de centro germinal, elemento que podría tener que ver con la patogenia del EBV asociado a linfomas. El aumento de poblaciones CD4 y de CD58 en el CG podría estar involucrado en el control del crecimiento de linfocitos B inducido por EBV. La expresión de LMP1 y de otras proteínas virales con características oncogénicas en CG podría ayudar en este proceso.\nUna falla en la respuesta del microambiente y/o la expresión de antígenos virales específicos con capacidad oncogénica en ciertas regiones histológicas podrían eventualmente asociarse al desarrollo posterior de linfomas en pacientes de corta edad como una complicación de la infección en nuestro país.
Ciencias de la salud
Doctora de la Universidad de Buenos Aires en Farmacia y Bioquímica