Desarrollo de modelos preclínicos de retinoblastoma intraocular, su evaluación y caracterización farmacológica

• Autores: Winter, Ursula Andrea
• Año de publicación: 2018
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Mercedes Mangano, Andrea María; Schaiquevich, Paula; Lagormarsino, Eduardo; Wikinski, Slvia; Cafferata, Eduardo
• Materia: Retinoblastoma; Ciencias de la vida
• Institución: Universidad de Buenos Aires

Fil: Winter, Ursula Andrea. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Buenos Aires, Argentina
La presente tesis doctoral versa sobre el estudio de distintos aspectos para la innovación del tratamiento farmacológico del retinoblastoma intraocular (RB). El objetivo principal del tratamiento de la enfermedad en el estadio intraocular es la conservación del globo ocular afectado por el tumor y de ser posible, la visión. En los últimos años, el desarrollo de nuevas vías de administración local de quimioterapia permitió incrementar la disponibilidad ocular de los fármacos y con ello, mejorar notablemente la sobrevida ocular de los pacientes. No obstante, aún es necesario identificar estrategias terapéuticas alternativas a las existentes, en especial para aquellos ojos afectados que recaen al tratamiento.\nSe aborda el estudio del esquema de administración como un factor determinante de la actividad antitumoral, mediante la evaluación de un nuevo esquema de administración de quimioterapia o tratamiento metronómico que consiste en la administración continua a dosis bajas de fármaco. Se estudió el efecto del esquema de administración sobre la actividad antitumoral de dos fármacos topotecan y melfalán, ampliamente usados en la clínica del RB. Los resultados obtenidos en los estudios in vitro e in vivo desarrollados indican que la administración metronómica de topotecan y melfalán es segura y resulta en un efecto antitumoral y antiangiogénico más potente que el observado en esquemas de dosis única, lo cual sustentaría la traslación al tratamiento clínico del esquema de administración metronómico de quimioterapia.\nOtro aspecto importante a considerar en cuanto a la innovación del tratamiento es la identificación de fármacos alternativos a los utilizados actualmente en la clínica del RB. Es por ello que, en base a reportes previos acerca de la actividad antitumoral de los\n13\ncardenolidos, se evaluó la digoxina como un compuesto potencialmente activo en el RB. Los resultados obtenidos mostraron que la digoxina ejercía un potente efecto citotóxico in vitro en líneas comerciales de RB y en los modelos celulares de endotelio humano. Asimismo, la digoxina mostró una farmacocinética y toxicidad favorable luego de ser administrada de forma intravítrea en un modelo in vivo. Así, los resultados obtenidos en los modelos preclínicos evaluados permiten proponer a la digoxina como un fármaco con potencial aplicación en el tratamiento conservador del RB, siendo la inyección intravítrea la vía de administración elegida tal de lograr una mayor exposición local-ocular reduciendo la exposición sistémica y, por lo tanto, la incidencia de eventos adversos serios asociados al uso del cardenolido.\nLa inyección intravítrea de fármaco debe ser realizada con una técnica de administración segura evitando la diseminación extraocular tumoral al retirar la aguja del sitio de inyección. Este aspecto no es menor y fue uno de los objetivos evaluados en la presente tesis. Para ello, se propuso desarrollar una técnica sensible, precisa, lineal, reproducible y clínicamente viable de evaluación de células tumorales que permita cuantificar el reflujo tumoral extraocular. Se desarrolló con éxito una técnica altamente sensible de cuantificación de ARN tumoral y trasladable a la práctica clínica local e internacional lo que aporta una herramienta útil para el tratamiento del RB en la evaluación de la seguridad del procedimiento de inyección intravítrea. Además, los resultados obtenidos al aplicarla en una cohorte de pacientes indicaron que la técnica de inyección intravítrea realizada actualmente en el hospital es segura no detectándose reflujo de células tumorales en ninguna de las muestras.\nUna vez que se manifiesta la recaída ocular al tratamiento farmacológico, no se cuenta con tratamiento de segunda línea de RB. Con el objetivo de abordar esta problemática fue fundamental el desarrollo de modelos preclínicos, in vitro e in vivo, que recapitulen la\n14\npatología de pacientes locales del Hospital de Pediatría JP Garrahan y que sirvan como herramientas de evaluación farmacológica. Los trabajos realizados permitieron establecer con éxito, y por primera vez en el campo del RB, dos cultivos primarios derivados de ambos ojos con tumor de un paciente con RB bilateral enucleado en primera línea de tratamiento. Luego de una caracterización fenotípica y genotípica extensa de los cultivos celulares tal de asegurar su origen, los mismos fueron utilizados para generar subtipos celulares resistentes a tres fármacos ampliamente utilizados en la clínica, topotecan, melfalán y carboplatino para estudiar la resistencia farmacológica adquirida y cruzada. La exposición repetida a los quimioterápicos mencionados resulto en la adquisición de resistencia a los fármacos a los cuales se expusieron las células y cruzada entre compuestos. Además, se registró una expresión incrementada de transportadores de eflujo tipo ABC lo cual podría explicar la disminución de la sensibilidad farmacológica a estos compuestos y adquisición de resistencia. Estos son los primeros estudios en los cuales se constata la resistencia farmacológica cruzada entre los fármacos evaluados lo cual es importante para el manejo clínico de los pacientes con recaídas al tratamiento.\nPor último, para sortear los mecanismos de resistencia adquirida, se evaluó la actividad citotóxica de la digoxina en los subtipos celulares resistentes lo cuales mostraron valores de IC50 de digoxina similares a la línea parental de la cual derivan. Es decir, la digoxina podría ser un fármaco de reposicionamiento capaz de revertir la resistencia adquirida a topotecan, melfalán y carboplatino lo que debería ser evaluado en estudios posteriores.\nPor todo lo antedicho, los estudios llevados a cabo en el marco de la presente tesis doctoral aportan datos novedosos sobre esquemas de tratamiento y fármacos con actividad citotóxica en este tumor y brindan modelos preclínicos tumorales de pacientes\n15\nlocales con RB como herramientas fundamentales para el estudio de la sensibilidad farmacológica y la resistencia adquirida.
Doctora de la Universidad de Buenos Aires en Ciencias Farmacéuticas