Proteína NS4B del virus Zika : interacción con moléculas del hospedador y su rol como inmunoevasina

• Autores: Sarratea, Maria Belen
• Año de publicación: 2022
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Fernández, Marisa Mariel; Malchiodi, Emilio Luis; Cavallaro, Lucía; Schattner, Mirta; Alvarez, Diego
• Materia: Virus Zika; Proteína NS4B; Flavivirus; Ciencias de la vida
• Institución: Universidad de Buenos Aires

Type I interferons (IFN I) are key mediators in antiviral innate immunity. During viral infections, nucleic acid sensing by intracellular receptors can trigger IFN-I production. However, many viral proteins can hinder this response. The aim of this thesis was to study the immune evasion mechanism of Zika virus NS4B protein in the IFN-I induction pathway.\nTransfections assays showed that NS4B expression inhibited IFN regulatory factors activation involved in different nucleic acid sensing cascades. NS4B correlated with lower levels of IFN-ß and IL-6 production. However, NS4B C100S mutant did not show these inhibitory effects.\nWe demonstrated that TBK1 kinase, a key component in IFN-I production pathway, is one of NS4B ligands. To further characterize this interaction, recombinant NS4B protein was expressed in bacteria and purified into micelles. TBK1-NS4B interaction was studied by surface plasmon resonance, demonstrating specific interaction.\nAltogether, these results add evidence that Zika virus NS4B would disrupt nucleic acid sensing cascade leading to an impairment of IFN-I production, highlighting the role of this viral protein in evading early immune response.
Fil: Sarratea, Maria Belen. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Buenos Aires, Argentina
Los interferones de tipo I (IFN-I) son mediadores claves en la respuesta inmune innata antiviral. Durante las infecciones virales, los ácidos nucleicos pueden ser detectados por receptores intracelulares estimulando su producción. Sin embargo, varias proteínas virales pueden disminuir esta respuesta. El objetivo de este trabajo de Tesis fue estudiar el mecanismo de inmunoevasión de la proteína NS4B de ZIKV implicada en la vía de inducción de IFN-I.\nMediante ensayos de transfección, se evidenció que la expresión aislada de NS4B disminuye la activación de factores reguladores del IFN, involucrados en las distintas vías de detección de ácidos nucleicos. NS4B se correlacionó con menores niveles de IFN-ß e IL-6. En cambio, la mutante NS4B C100S no presentó estos efectos inhibitorios.\nDemostramos que la quinasa TBK1, involucrada en estas vías, es un ligando de NS4B. Para caracterizar esta interacción, se obtuvieron de manera recombinante distintas construcciones de NS4B a partir de cultivos bacterianos. La interacción de TBK1-NS4B fue estudiada por métodos de Resonancia Plasmónica de Superficie, demostrando la interacción específica.\nEstos resultados demuestran que NS4B de ZIKV inhibiría las vías de detección de ácidos nucleicos disminuyendo la producción de IFN-I, constituyendo así una estrategia del virus para evadir la respuesta inmune temprana.
Doctora de la Universidad de Buenos Aires en Ciencias de la Salud