Caracterización de tumores de mama según la expresión de P-Rex1 y análisis in vitro del rol de TGFB2 y los receptores ErbB como posibles activadores de vías de señalización asociad...

• Autores: Lara Montero, Ángela
• Año de publicación: 2018
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis de maestría
• Colaborador/a o director/a de tesis: Wertheimer, Eva; Salatino, Mariana; Candolfi, Mariana; Fabris, Victoria
• Materia: Cáncer de mama; P-Rex1; Señalización; HRG; Rac1; TGFB2; ErbB; Breast Cancer; P-Rex1; Signaling; HRG; Rac1; TGFB2; ErbB; Ciencias de la vida
• Institución: Universidad de Buenos Aires

Rac1 is a Rho GTPasa widely involved in motility, mitogénesis,\ntransformation and metastasis. P-Rex1 is a Rac1 activator that is overexpressed\nin breast cancer and its silencing inhibits cell migration. P-Rex1\noverexpression is currently associated with luminal tumors. In this work, we\naimed to analyze the presence of P-Rex1 in samples from patients from the\nMarie Curie Hospital (Buenos Aires City), and determine its relationship with\nclinical and histopathological parameters. For this purpose, P-Rex1 levels\nwere determined in biopsies, tumors and adjacent tissue from primary\nsurgery in patients not undergoing neoadjuvant therapy. Our analysis\nrevealed high levels of P-Rex1 in both luminal and basal tumors. These\nresults confirm P-Rex1 potential as a therapeutic target not only for the\ntreatment of luminal tumors but also for a certain population of triple negative\npatients.\nHeregulin (HRG) is a ligand for tyrosine-kinase ErbB receptors that\ntriggers Rac1 activation of through P-Rex1 in breast cancer cells. This\nactivation leads to an increase in TGF?2 expression. In fact, the TGF? family\nis involved in cell migration and metastasis. Based on this background, we\naimed to study the dynamics of Rac1 activation by HRG and determine\nTGF?2 ability to induce migration and to interact with ErbB receptors in\nbreast cancer cell lines. Measurements of activated-Rac1 by pull down\nassays, measurement of mRNA by quantitative PCR and assessment of\nmigration by wound healing assays were performed. We conclude that HRG\nis necessary for the initial activation of Rac. Subsequently, breast cancer\ncells begin producing autocrine factors that are necessary for maintenance of\nHRG-initiated Rac1 activation. In addition, we show that HRG induces an\nincrease in mRNA of TGF?2 in a time-dependent manner. Moreover, the\nwound healing assays revealed that TGF?2 itself induces migration of breast\ncancer cells in a dose-dependent manner and that the combined addition of\nHRG and TGF?2 produces the same increase in cell migration as HRG\nalone. These results suggest that there is a sequential relationship between\nthe peak of Rac1 activation and the maximum increase of TGF?2. We\npropose that this cytokine is necessary for the maintenance of the phenotype\ntriggered by HRG in breast cancer cells.\nThe results obtained as a whole will contribute to establishing the\nprognostic and therapeutic value of P-Rex1 and the elucidation of relevant\nsignaling pathways for tumor progression. The determination of a cross\nsignaling between TGF?2 and HRG could contribute to the search for\nalternative therapies for breast cancer patients.
Fil: Lara Montero, Ángela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Buenos Aires, Argentina
Rac1 es una Rho GTPasa ampliamente implicada en motilidad,\nmitogénesis, transformación y metástasis. P-Rex1 es un activador de Rac1\nque se encuentra sobre expresado en cáncer de mama y su silenciamiento\ninhibe la migración celular. La sobreexpresión de P-Rex1 está asociada a\ntumores de tipo luminal. En este trabajo nos propusimos analizar la\npresencia de P-Rex1 en muestras de pacientes provenientes del Hospital\nMarie Curie de la Ciudad de Buenos Aires, y determinar su relación con\nparámetros clínicos e histopatológicos. Para tal fin, se determinaron los\nniveles de P-Rex1 en biopsias, tumores y tejido adyacente provenientes de\ncirugía primaria de pacientes no sometidas a terapia neoadyuvante. Nuestro\nanálisis reveló altos niveles de P-Rex1, no solo en muestras de tipo luminal\nsino también en los tumores de tipo basal. Estos resultados confirman el\npotencial de P-Rex1 como target terapéutico tanto para el tratamiento de\ntumores luminales como para cierta población de pacientes triple negativos.\nLa heregulina (HRG) es un ligando de los receptores tirosina quinasa\nErbB que gatilla la activación de Rac1 a través de P-Rex1 en células de\ncáncer de mama. Dicha activación conduce a un aumento en la expresión de\nTGF?2. De hecho, la familia TGF? está involucrada en migración celular y\nmetástasis. Basados en estos antecedentes nos propusimos estudiar las\ndinámicas de activación de Rac1 por HRG y determinar la capacidad de\nTGF?2 de inducir migración y de interactuar con los receptores ErbB en\nlíneas celulares de cáncer de mama. Se realizaron mediciones de Rac1\nactivado por ensayos de pull down, mediciones de ARNm por PCR\ncuantitativa y ensayos de migración por cicatrización de herida. Concluimos\nque la HRG es necesaria para la activación inicial de Rac. Posteriormente,\nlas células comienzan a producir factores autócrinos que son necesarios\npara el mantenimiento de la activación de Rac1 iniciada por HRG. Además,\nmostramos que HRG induce un aumento de ARNm de TGF?2 de forma\ndependiente del tiempo. Es más, los ensayos de cicatrización de heridas\nrevelaron que TGF?2 en sí mismo induce la migración de las células de\ncáncer de mama de una manera dependiente de la dosis y que la adición\ncombinada de HRG y TGF?2 produce el mismo aumento en la migración\ncelular que HRG solo. Estos resultados sugieren que existe una relación\nsecuencial entre el pico de activación de Rac1 y el aumento máximo de\nTGF?2. Proponemos que esta citoquina es necesaria para el mantenimiento\ndel fenotipo desencadenado por HRG de las células de cáncer de mama.\nLos resultados obtenidos en su conjunto contribuirán a establecer el\nvalor pronostico y terapéutico de P-Rex1 y a la dilucidación de vías de\nseñalización relevantes para la progresión tumoral. La determinación de una\nseñalización cruzada entre TGF?2 y HRG podría contribuir a la búsqueda de\nterapias alternativas para pacientes con cáncer de mama.
Magíster de la Universidad de Buenos Aires en Biología Molecular Médica