El uso de reacciones de PCR anidadas mejora la tipificación genética de Mycoplasma hyopneumoniae a partir de diferentes muestras clínicas

• Autores: Rebaque, F.; Lucchesi, P. M. A.; Ambrogi, A.; Tamiozzo, P. J.
• Año de publicación: 2016
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: artículo
• Fuente: InVet, vol. 18, nº2
• Materia: Mycoplasma hyopneumoniae; Genotipos; Muestras clínicas; MLVA; P97; P146; H4; H5; Mycoplasma hyopneumoniae; Genotypes; Clinical specimens; MLVA; P97; P146; H4; H5
• Institución: Universidad de Buenos Aires

It is important to identify distinct Mycoplasma hyopneumoniae genotypes to improve the study and understanding of some epidemiological aspects of the disease it produces. MLVA (Multiple-Locus Variable-number tandem repeats Analysis) methodology would be the most adequate for typing this pathogen from clinical samples. The objective of the present study was to design nested PCR assays for VNTR (Variable Number of Tandem Repeats) loci P97, H4, and H5 with the aim to obtain a high analytical sensitivity. To evaluate them, DNA samples positive for M. hyopneumoniae were analyzed by the nested PCR assays in parallel to conventional PCR assays, and the proportion of positive results with each approach were compared. Taking into account the higher sensitivity of the PCR assays developed in this study, it was concluded that the recommended approach to type M. hyopneumoniae from clinical samples ? even when they contain a low load of the agent? is to perform nested PCR assays for these loci, along with the other one previously informed for P146.
Fil: Rebaque, F. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Agronomía y Veterinaria. Departamento de Patología Animal. Córdoba, Argentina
Fil: Lucchesi, P. M. A. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Departamento de Sanidad Animal y Medicina Preventiva. Tandil, Argentina
Fil: Lucchesi, P. M. A. CONICET. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil (CIVETAN). Tandil, Argentina
Fil: Ambrogi, A. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Agronomía y Veterinaria. Departamento de Patología Animal. Córdoba, Argentina
Fil: Tamiozzo, P. J. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Agronomía y Veterinaria. Departamento de Patología Animal. Córdoba, Argentina
Identificar distintos genotipos de Mycoplasma hyopneumoniae es importante para estudiar y entender mejor algunos aspectos epidemiológicos de la enfermedad que éste produce. La metodología de MLVA (Multiple-Locus Variable-number tandem-repeats Analysis) sería la más adecuada para la tipificación del patógeno a partir de muestras clínicas. El objetivo del presente trabajo fue diseñar PCR anidadas para los loci VNTR (Variable Number of Tandem Repeats) P97, H4 y H5 con la finalidad de obtener pruebas de mayor sensibilidad analítica. Para evaluarlas se analizaron muestras de ADN positivas para M. hyopneumoniae en paralelo con una PCR convencional para cada locus y se compararon las proporciones de positivos con cada formato. Dada la mayor sensibilidad de las reacciones desarrolladas en el presente estudio, se recomienda utilizar reacciones anidadas de estos loci para la tipificación de M. hyopneumoniae en muestras clínicas, y realizarlas en conjunto con la PCR anidada para el locus P146 previamente informada.