Caracterización molecular de poblaciones naturales de trypanosoma cruzi en muestras de pacientes en ensayos clínicos con drogas tripanocidas

• Autores: Ramírez Gómez, Juan Carlos
• Año de publicación: 2017
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Nowicki, Cristina; Schijman, Alejandro G.; Targovnik, Héctor; Pereira, Claudio; Sánchez, Daniel
• Materia: Trypanosoma Cruzi; Polimorfismo genético; Ensayos clínicos; Enfermedad de Chagas; Caracterización molecular; Ciencia de la vida
• Institución: Universidad de Buenos Aires

The natural populations of Trypanosoma cruzi, causative agent of Chagas disease, are composed of multiple clones. The role that parasite genetic diversity plays in clinical and therapeutic scenarios remains unclear. Genetic polymorphism of T. cruzi populations was analyzed before and after treatment with different trypanocidal drugs [E1224 (ravuconazol), benznidazol (BZN) y Fexinidazol (FXN)] of chronic patients. A standardized qPCR assay was used as surrogate marker of treatment failure and only patients with positive qPCR results were included. qPCR positive samples from baseline and follow-up were characterized by T. cruzi satellite DNA (SatDNA) sequence analysis and PCR-RFLP of hypervariable regions of kinetoplastid DNA (kDNA). BZN and FXN showed higher trypanocidal effect than E1224. The genetic variability of T. cruzi populations before and after treatment in patients refractory to E1224 was as high as that observed in patients from the Placebo group. Our findings suggest that the genetic composition of T. cruzi bloodstream populations during follow-up reflects the natural fluctuation of multiclonal parasite populations in chronic Chagas disease. This is the first report documenting the molecular characterization of T cruzi populations after treatment and during natural infection of Chagas disease patients.
Fil: Ramírez Gómez, Juan Carlos. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Buenos Aires, Argentina
Las poblaciones naturales de Trypanosoma cruzi, agente etiológico de la enfermedad de Chagas, están compuestas por múltiples clones. Se ha postulado que el polimorfismo genético de T. cruzi podría estar implicado en su respuesta diferencial a drogas. En este trabajo se caracterizó la variabilidad genética de las poblaciones de T. cruzi detectables en pacientes crónicos antes y después del tratamiento con diferentes drogas tripanocidas [E1224 (ravuconazol), benznidazol (BZN) y Fexinidazol (FXN)]. Un método estandarizado de qPCR fue utilizado como marcador de falla terapéutica y sólo se incluyeron pacientes con resultados positivos en el tamizaje. Las muestras qPCR positivas pre- y pos-tratamiento fueron caracterizadas mediante análisis de patrones de secuencias de ADN satélite (ADNSat) y perfiles de PCR-RFLP de las regiones hipervariables del ADN de kinetoplasto (ADNk). El BZN y el FXN mostraron un mayor efecto tripanocida que el E1224. Los pacientes refractarios al E1224 tuvieron una variabilidad tan alta en sus poblaciones de T. cruzi pre- y pos-tratamiento como la observada en los pacientes del grupo Placebo. Nuestros hallazgos sugieren que la composición genética de las poblaciones T. cruzi circulantes durante el seguimiento reflejan la fluctuación natural de poblaciones policlonales en la infección crónica.
Ciencias de la salud
Doctor de la Universidad de Buenos Aires en Farmacia y Bioquímica