Diseño y caracterización de nuevas herramientas para el diagnóstico de la tuberculosis bovina

• Autores: Villafañe, Luciana María
• Año de publicación: 2024
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Forrellad, Marina Andrea (directora); Eirin, Maria Emilia (codirectora)
• Materia: Diagnosis; Bovine Tuberculosis; Mycobacterium bovis; Antigens; Antibodies; Diagnóstico; Tuberculosis Bovina; Antígenos; Anticuerpos
• Institución: Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria

Tesis para optar al título de Doctora en Ciencias Biológicas, de la Universidad de Buenos Aires, en 2024
La tuberculosis bovina es una enfermedad infectocontagiosa, zoonótica y endémica en el país causada por Mycobacterium bovis, que afecta al ganado bovino. La prueba diagnóstica de referencia internacional es la intradermorreacción. Para aumentar la sensibilidad diagnóstica, se utiliza complementariamente la prueba de IFN-ɣ, que detecta la liberación in vitro de IFN-ɣ después de la estimulación con antígenos de M. bovis. El objetivo del presente trabajo se centró en diseñar y desarrollar nuevas herramientas para el diagnóstico diferencial de la tuberculosis bovina, mediante la identificación de nuevos antígenos y la generación de anticuerpos anti-IFN-ɣ bovino. Se seleccionaron in silico proteínas de M. bovis y expresaron de forma recombinante en E. coli y baculovirus. Se determinó su capacidad de inducir la liberación de IFN-ɣ y de detección de anticuerpos anti-M. bovis. Además, se generaron anticuerpos mono y policlonales en ratones, camélidos y aves anti-IFN-ɣ bovino. En muestras de animales sensibilizados con M. bovis, las proteínas PolH-Mb0309, PolH-EsxG y la mezcla BvCk (PolH-ESAT-6/PolH-CFP-10/PolHMb3645c) indujeron la liberación diferencial de IFN-ɣ, mientras que His-Mb2002c permitió detectar anticuerpos anti-M. bovis. En ensayos de ELISA de captura, los anticuerpos de camélidos demostraron detectar IFN-ɣ bovino capturado. Las antígenos y anticuerpos obtenidos representan un progreso en la optimización del diagnóstico de la tuberculosis bovina.
Bovine tuberculosis is an infectious, contagious, zoonotic, and endemic disease caused by Mycobacterium bovis, which affects cattle. The international reference diagnostic test is the intradermal reaction. The IFN-ɣ test is also employed to improve diagnostic sensitivity. This test detects the in vitro release of IFN-ɣ after stimulation with M. bovis antigens. This research aimed at designing and developing new tools for the differential diagnosis of bovine tuberculosis by identifying new M. bovis antigens and generating anti-bovine IFN-ɣ antibodies. M. bovis proteins were selected using bioinformatics techniques and expressed recombinantly in E. coli and baculovirus to identify new antigens. Subsequently, the proteins were evaluated in IFN-ɣ-release and anti-M. bovis-antibody detection assays. In addition, recombinant bovine IFN-ɣ was produced in E. coli to generate mono and polyclonal antibodies in mice, camelids and birds. PolH-Mb0309, PolH-EsxG, and the BvCk mixture (PolH-ESAT-6/PolH-CFP-10/PolH-Mb3645c) induced differential release of IFN-ɣ in samples from animals sensitized with M. bovis, while His-Mb2002c allowed the detection of anti-M. bovis antibodies. In capture ELISA assays, camelid antibodies were able to identify bovine IFN-ɣ captured. The antigens and antibodies obtained in this study represent progress in the bovine tuberculosis diagnosis optimization.
Instituto de Biotecnología
Fil: Villafañe, Luciana María. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica; Argentina
Fil: Villafañe, Luciana María. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular (IABIMO); Argentina
Fil: Villafañe, Luciana María. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina