TcTASV: Familia de proteínas de superficie de Trypanosoma cruzi. Su aplicación en el inmunodiagnóstico de la infección chagásica en humanos y reservorios domésticos - Floridia Yapur, Noelia Aldana del Rosario (2018)
La enfermedad de Chagas causada por Trypanosoma cruzi afecta actualmente a millones de personas en América Latina y el mundo. El apropiado diagnóstico del paciente chagásico, cualquiera sea su edad y etapa infectiva, es fundamental para el pronóstico, tratamiento y prevención de la transmisión. La Organización Mundial de la Salud ha resaltado la necesidad del perfeccionamiento de las herramientas diagnósticas disponibles para la infección por este parásito o el desarrollo de nuevas. Las técnicas serológicas convencionales además de llevar a resultados inconclusos, resultan inespecíficas ante infecciones con patógenos emparentados y co-endémicos como Leishmania spp. Estudios multicéntricos han reportado que el desempeño de los kits convencionales, además, varía según la procedencia de las muestras. Este fenómeno se atribuye a que las muestras en estudio pertenezcan a individuos infectados con distintos linajes de diferentes regiones. Se requiere de plataformas diagnósticas sensibles y específicas que superen estas dificultades y puedan ser utilizadas en centros sin especialización y en zonas rurales (técnicas POC, "Point of care"). A esto, se suman la falta de una prueba que permita la determinación de cura en pacientes tratados y las limitaciones a la hora de detectar la infección en pacientes congénitos durante los primeros meses de vida. Por otro lado, se requieren de herramientas para la vigilancia epidemiológica en áreas endémicas en donde la detección de la infección en reservorios domésticos, como ser los perros, es fundamental para evaluar el riesgo de transmisión al hombre. La descripción de la familia TcTASV, la última familia multigénica de T. cruzi en ser descubierta, devino en el planteamiento de esta tesis. Los miembros TcTASV se agrupan en cuatro subfamilias: A, B, C y W, y, en general, poseen características potencialmente útiles para el diagnóstico serológico de la infección chagásica: se expresan en la superficie del parásito, diferencialmente en el tripomastigote, y no comparten homología de secuencias con los genomas de Leishmania spp. El objetivo de esta tesis, en vista de las problemáticas especificadas, fue estudiar la aplicabilidad de estas proteínas recientemente descubiertas para la detección de la infección chagásica tanto en humanos como en reservorios domésticos.En la resolución de este trabajo, en primer lugar, nos enfrentamos al desafío de clonar y expresar estas proteínas en estado soluble para poder utilizarlas en los ensayos de inmunodiagnóstico. Una vez ajustados los protocolos de producción de las proteínas recombinantes estandarizamos los ensayos de ELISA para la detección de anticuerpos anti-TcTASV en humanos y en perros. Hemos demostrado que los antígenos TcTASV-A y TcTASV-C son específicos para la determinación de la infección tanto en humanos como en perros, ya que ninguno de los sueros de individuos sanos, leishmaniásicos o con estrongiloidiosis estudiados reaccionaron ante los mismos. Si bien la sensibilidad de los antígenos individualmente evaluados resultó de baja a moderada, la combinación de los mismos en el ensayo de ELISA-Mix A+C permitió la detección de un alto porcentaje de muestras de individuos infectados tanto para el caso de humanos como para los reservorios domésticos estudiados aquí. Además, el ELISA-Mix A+C demostró ser una técnica de elevado desempeño para el caso particular de pacientes pediátricos. Sumado a esto, logró detectar de forma temprana el impacto del tratamiento en mencionados pacientes: la disminución de anticuerpos anti-TcTASV se evidenció en un mayor porcentaje de pacientes, con respecto a la disminución de anticuerpos anti-T. cruzi totales, determinados por serología convencional.Por otro lado, siendo los perros el reservorio de mayor importancia en el ciclo doméstico de este parásito, estudiamos el desempeño diagnóstico de los antígenos TcTASVs para la detección de la infección por T. cruzi en perros infectados naturalmente de áreas endémicas. En concordancia con otros resultados de nuestro grupo observamos que TcTASV-C, principalmente, y TcTASV-A, serían indicadores de infección activa. Por lo tanto, los perros reactivos ante los antígenos TcTASV-A y -C podrían tener un mayor impacto epidemiológico al representar una fuente mayor de parásitos para un vector no infectado que se alimente de éstos. Dada su liberación al medio tanto en forma soluble como contenida en vesículas, estudiamos la presencia de TcTASV-C en el suero de perros infectados a modo de un biomarcador de infección, mediante un ensayo de Western Blot. Los resultados positivos fueron corroborados mediante la captura del antígeno en el suero de perros infectados utilizando columnas de afinidad específicas preparadas en el laboratorio. Los resultados obtenidos podrían derivar en el uso de TcTASV-C como candidato para el desarrollo de pruebas diagnósticas rápidas a ser aplicadas en zonas endémicas para detectar reservorios con infección activa.Los resultados de este trabajo, demuestran que los antígenos TcTASV, o péptidos derivados de sus secuencias, podrían ser sumados a plataformas de diagnóstico contribuyendo positivamente a las problemáticas planteadas. Por otro lado, y no menos importante, aportan evidencia sobre la expresión de estas proteínas recientemente descubiertas durante el curso natural de la infección por T. cruzi en los distintos hospedadores del ciclo doméstico. Se requieren de mayores estudios para confirmar la utilidad diagnóstica de las proteínas TcTASV y para elucidar su rol en la biología de T. cruzi y en su interacción con los hospedadores mamíferos.