A functional characterization of AMP-activated protein kinase in Trypanosoma cruzi

Autores
Sternlieb, Tamara; Genta, Patricio; Schoijet, Alejandra Cecilia; Barrera, Nadia Maricel; Massimino Stepñicka, Milena; Alonso, Guillermo Daniel
Año de publicación
2017
Idioma
inglés
Tipo de recurso
documento de conferencia
Estado
versión publicada
Descripción
The AMP-activated protein kinase (AMPK) is a heterotrimeric enzyme involved in maintaining energy homeostasis in response to different stresses in many organisms. Sequence and structure of its subunits may change between organisms, but they maintain the same function. The α subunit contains a N-terminal kinase catalytic domain, the β subunit acts as a scaffold and intervenes in the localization of the complex and the γ subunits binds AMP. During the transition from the mammal host to the insect vector, Trypanosoma cruzi suffers nutritional stress from the absence of glucose in the insect?s midgut. The ability to respond to this stress, allows the parasite to differentiate and survive. Recently, it was shown that Trypanosoma brucei AMPK is involved in surface protein expression changes in response to nutritional stress and differentiation. We identified four candidate genes for the AMPK subunits of T. cruzi (α1, α2, β and γ). Each of these subunits was capable of reverting the ?glucose dependent? phenotype of S. cerevisiae conditional mutants alternatively lacking one subunit of the AMPK ortholog SNF1. Also, we overexpressed the α1, β and γ subunits with a hemagglutinin (HA) Tag in CL Brener epimastigotes and evaluated their localization and possible post-translational modifications. Western blots using anti-PhosphoAMPK antibody showed specific stripes corresponding to the expected MW of the alpha subunits. These stripes are reduced in intensity or completely deleted with Lambda phosphatase treatment. Also, epimastigotes treated with an AMPK specific activator show a shift in the intensity pattern of the stripes. Thus, the phosphorylation pattern of the α subunits can be modified in vivo. RT-PCR assays also revealed the endogenous α2 mRNA, but not the α1 mRNA in epimastigotes. Our results show, for the first time, the presence of an AMPK ortholog in Trypanosoma cruzi. In the future, we aim to discover its role in the life cycle and stress responses of this parasite.
Fil: Sternlieb, Tamara. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentina
Fil: Genta, Patricio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentina
Fil: Schoijet, Alejandra Cecilia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentina
Fil: Barrera, Nadia Maricel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentina
Fil: Massimino Stepñicka, Milena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentina
Fil: Alonso, Guillermo Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentina
LXII Reunión anual de la Sociedad Argentina de investigación Clínica; LIII Reunión anual de la Sociedad Argentina de Investigación Bioquímica y Biología Molecular; LXV Reunión anual de la Sociedad Argentina de Inmunología; Reunión de la Sociedad Argentina de Andrología; XLVI Reunión anual de la Sociedad Argentina de Biofísica; XIX Reunión anual de la Sociedad Argentina de Biología; XLIX Reunión anual de la Sociedad Argentina de Farmacología Experimental; Reunión anual de la Sociedad Argentina de Fisiología; Reunión de la Sociedad Argentina de Hematología; XXIX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología
Ciudad Autónoma de Buenos Aires
Argentina
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Sociedad Argentina de Biofísica
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Materia
AMPK
STRESS RESPONSE
SIGNALING
Nivel de accesibilidad
acceso abierto
Condiciones de uso
https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/ar/
Repositorio
CONICET Digital (CONICET)
Institución
Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas
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The ability to respond to this stress, allows the parasite to differentiate and survive. Recently, it was shown that Trypanosoma brucei AMPK is involved in surface protein expression changes in response to nutritional stress and differentiation. We identified four candidate genes for the AMPK subunits of T. cruzi (α1, α2, β and γ). Each of these subunits was capable of reverting the ?glucose dependent? phenotype of S. cerevisiae conditional mutants alternatively lacking one subunit of the AMPK ortholog SNF1. Also, we overexpressed the α1, β and γ subunits with a hemagglutinin (HA) Tag in CL Brener epimastigotes and evaluated their localization and possible post-translational modifications. Western blots using anti-PhosphoAMPK antibody showed specific stripes corresponding to the expected MW of the alpha subunits. These stripes are reduced in intensity or completely deleted with Lambda phosphatase treatment. Also, epimastigotes treated with an AMPK specific activator show a shift in the intensity pattern of the stripes. Thus, the phosphorylation pattern of the α subunits can be modified in vivo. RT-PCR assays also revealed the endogenous α2 mRNA, but not the α1 mRNA in epimastigotes. Our results show, for the first time, the presence of an AMPK ortholog in Trypanosoma cruzi. In the future, we aim to discover its role in the life cycle and stress responses of this parasite.Fil: Sternlieb, Tamara. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Genta, Patricio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Schoijet, Alejandra Cecilia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Barrera, Nadia Maricel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Massimino Stepñicka, Milena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Alonso, Guillermo Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaLXII Reunión anual de la Sociedad Argentina de investigación Clínica; LIII Reunión anual de la Sociedad Argentina de Investigación Bioquímica y Biología Molecular; LXV Reunión anual de la Sociedad Argentina de Inmunología; Reunión de la Sociedad Argentina de Andrología; XLVI Reunión anual de la Sociedad Argentina de Biofísica; XIX Reunión anual de la Sociedad Argentina de Biología; XLIX Reunión anual de la Sociedad Argentina de Farmacología Experimental; Reunión anual de la Sociedad Argentina de Fisiología; Reunión de la Sociedad Argentina de Hematología; XXIX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de ProtozoologíaCiudad Autónoma de Buenos AiresArgentinaSociedad Argentina de InvestigaciónSociedad Argentina de Investigación Bioquímica y Biología MolecularSociedad Argentina de InmunologíaSociedad Argentina de AndrologíaSociedad Argentina de BiofísicaSociedad Argentina de BiologíaSociedad Argentina de Farmacología ExperimentalSociedad Argentina de FisiologíaSociedad Argentina de HematologíaSociedad Argentina de ProtozoologíaFundación Revista Medicina2017info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/conferenceObjectReuniónJournalhttp://purl.org/coar/resource_type/c_5794info:ar-repo/semantics/documentoDeConferenciaapplication/pdfapplication/pdfapplication/pdfapplication/pdfapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/11336/215627A functional characterization of AMP-activated protein kinase in Trypanosoma cruzi; LXII Reunión anual de la Sociedad Argentina de investigación Clínica; LIII Reunión anual de la Sociedad Argentina de Investigación Bioquímica y Biología Molecular; LXV Reunión anual de la Sociedad Argentina de Inmunología; Reunión de la Sociedad Argentina de Andrología; XLVI Reunión anual de la Sociedad Argentina de Biofísica; XIX Reunión anual de la Sociedad Argentina de Biología; XLIX Reunión anual de la Sociedad Argentina de Farmacología Experimental; Reunión anual de la Sociedad Argentina de Fisiología; Reunión de la Sociedad Argentina de Hematología; XXIX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología; Ciudad Autónoma de Buenos Aires; Argentina; 2017; 209-2091669-9106CONICET DigitalCONICETenginfo:eu-repo/semantics/altIdentifier/url/https://medicinabuenosaires.com/revistas/vol77-17/Vol.77SuplementoI-2017.pdfInternacionalinfo:eu-repo/semantics/openAccesshttps://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/ar/reponame:CONICET Digital (CONICET)instname:Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas2025-09-03T10:08:07Zoai:ri.conicet.gov.ar:11336/215627instacron:CONICETInstitucionalhttp://ri.conicet.gov.ar/Organismo científico-tecnológicoNo correspondehttp://ri.conicet.gov.ar/oai/requestdasensio@conicet.gov.ar; lcarlino@conicet.gov.arArgentinaNo correspondeNo correspondeNo correspondeopendoar:34982025-09-03 10:08:07.926CONICET Digital (CONICET) - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicasfalse
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Fil: Sternlieb, Tamara. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentina
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