Expression of the hemagglutinin HA1 subunit of the equine influenza virus using a baculovirus expression system

Autores
Sguazza, Guillermo Hernán; Fuentealba, Nadia Analia; Tizzano, Marco Antonio; Galosi, Cecilia Monica; Pecoraro, Marcelo Ricardo
Año de publicación
2013
Idioma
inglés
Tipo de recurso
artículo
Estado
versión publicada
Descripción
Equine influenza virus is a leading cause of respiratory disease in horses worldwide. Disease prevention is by vaccination with inactivated whole virus vaccines. Most current influenza vaccines are generated in embryonated hens´ eggs. Virions are harvested from allantoic fluid and chemically inactivated. Although this system has served well over the years, the use of eggs as the substrate for vaccine production has several well-recognized disadvantages (cost, egg supply, waste disposal and yield in eggs). The aim of this study was to evaluate a baculovirus system as a potential method for producing recombinant equine influenza hemagglutinin to be used as a vaccine. The hemagglutinin ectodomain (HA1 subunit) was cloned and expressed using a baculovirus expression vector. The expression was determined by SDS-PAGE and immunoblotting. A high yield, 20μg/ml of viral protein, was obtained from recombinant baculovirus-infected cells. The immune response in BALB/c mice was examined following rHA1 inoculation. Preliminary results show that recombinant hemagglutinin expressed from baculovirus elicits a strong antibody response in mice; therefore it could be used as an antigen for subunit vaccines and diagnostic tests.
El virus de la infl uenza equina es una de las principales causas de enfermedad respiratoria en caballos de todo el mundo. La prevención de la enfermedad es a través de la vacunación con vacunas a virus inactivado. La mayoría de las vacunas se producen en huevos embrionados, de los cuales los viriones son cosechados del líquido alantoideo e inactivados químicamente. Aunque este sistema ha servido bien durante años, el uso de huevos como sustrato para la producción de vacuna presenta varias desventajas bien reconocidas (costo, provisión de huevos, manejo de los residuos, rinde por huevo). El objetivo del presente trabajo fue evaluar preliminarmente un sistema de expresión en baculovirus como método de producción de hemoaglutinina recombinante (rHA) para ser utilizada como vacuna para la prevención de la infl uenza equina. Para ello el ectodominio de la hemaglutinina (la subunidad HA1) del virus de la infl uenza equina se expresó en células de insecto infectadas con un baculovirus recombinante. La expresión fue demostrada por SDS-PAGE e inmunoblotting. El método empleado fue capaz de producir gran cantidad de rHA1. En este estudio se obtuvieron 20 μg/ml (200 μg de HA1 purifi cada de 2,5x107 células infectadas). La respuesta inmune fue evaluada mediante la inmunización de ratones BALB/c. Los resultados preliminares demostraron que la proteína recombinante expresada en baculovirus genera una fuerte respuesta inmune en ratones, por lo tanto podría ser utilizada como antígeno para la producción de una vacuna a subunidades y en pruebas diagnósticas.
Fil: Sguazza, Guillermo Hernán. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina
Fil: Fuentealba, Nadia Analia. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina
Fil: Tizzano, Marco Antonio. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina
Fil: Galosi, Cecilia Monica. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas; Argentina
Fil: Pecoraro, Marcelo Ricardo. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina
Materia
Hemagglutinin
Baculovirus
Vaccine
Nivel de accesibilidad
acceso abierto
Condiciones de uso
https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/2.5/ar/
Repositorio
CONICET Digital (CONICET)
Institución
Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas
OAI Identificador
oai:ri.conicet.gov.ar:11336/24260
Acceder
id CONICETDig_b08121a45b0d2e93c0ec050ca08b5c63
oai_identifier_str oai:ri.conicet.gov.ar:11336/24260
network_acronym_str CONICETDig
repository_id_str 3498
network_name_str CONICET Digital (CONICET)
spelling Expression of the hemagglutinin HA1 subunit of the equine influenza virus using a baculovirus expression systemExpresión de la subunidad HA1 del virus de influenza equina utilizando un sistema de expresión en baculovirusSguazza, Guillermo HernánFuentealba, Nadia AnaliaTizzano, Marco AntonioGalosi, Cecilia MonicaPecoraro, Marcelo RicardoHemagglutininBaculovirusVaccinehttps://purl.org/becyt/ford/1.6https://purl.org/becyt/ford/1Equine influenza virus is a leading cause of respiratory disease in horses worldwide. Disease prevention is by vaccination with inactivated whole virus vaccines. Most current influenza vaccines are generated in embryonated hens´ eggs. Virions are harvested from allantoic fluid and chemically inactivated. Although this system has served well over the years, the use of eggs as the substrate for vaccine production has several well-recognized disadvantages (cost, egg supply, waste disposal and yield in eggs). The aim of this study was to evaluate a baculovirus system as a potential method for producing recombinant equine influenza hemagglutinin to be used as a vaccine. The hemagglutinin ectodomain (HA1 subunit) was cloned and expressed using a baculovirus expression vector. The expression was determined by SDS-PAGE and immunoblotting. A high yield, 20μg/ml of viral protein, was obtained from recombinant baculovirus-infected cells. The immune response in BALB/c mice was examined following rHA1 inoculation. Preliminary results show that recombinant hemagglutinin expressed from baculovirus elicits a strong antibody response in mice; therefore it could be used as an antigen for subunit vaccines and diagnostic tests.El virus de la infl uenza equina es una de las principales causas de enfermedad respiratoria en caballos de todo el mundo. La prevención de la enfermedad es a través de la vacunación con vacunas a virus inactivado. La mayoría de las vacunas se producen en huevos embrionados, de los cuales los viriones son cosechados del líquido alantoideo e inactivados químicamente. Aunque este sistema ha servido bien durante años, el uso de huevos como sustrato para la producción de vacuna presenta varias desventajas bien reconocidas (costo, provisión de huevos, manejo de los residuos, rinde por huevo). El objetivo del presente trabajo fue evaluar preliminarmente un sistema de expresión en baculovirus como método de producción de hemoaglutinina recombinante (rHA) para ser utilizada como vacuna para la prevención de la infl uenza equina. Para ello el ectodominio de la hemaglutinina (la subunidad HA1) del virus de la infl uenza equina se expresó en células de insecto infectadas con un baculovirus recombinante. La expresión fue demostrada por SDS-PAGE e inmunoblotting. El método empleado fue capaz de producir gran cantidad de rHA1. En este estudio se obtuvieron 20 μg/ml (200 μg de HA1 purifi cada de 2,5x107 células infectadas). La respuesta inmune fue evaluada mediante la inmunización de ratones BALB/c. Los resultados preliminares demostraron que la proteína recombinante expresada en baculovirus genera una fuerte respuesta inmune en ratones, por lo tanto podría ser utilizada como antígeno para la producción de una vacuna a subunidades y en pruebas diagnósticas.Fil: Sguazza, Guillermo Hernán. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Fuentealba, Nadia Analia. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Tizzano, Marco Antonio. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Galosi, Cecilia Monica. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas; ArgentinaFil: Pecoraro, Marcelo Ricardo. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaAsociación Argentina de Microbiología2013-10info:eu-repo/semantics/articleinfo:eu-repo/semantics/publishedVersionhttp://purl.org/coar/resource_type/c_6501info:ar-repo/semantics/articuloapplication/pdfapplication/pdfapplication/pdfapplication/pdfapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/11336/24260Sguazza, Guillermo Hernán; Fuentealba, Nadia Analia; Tizzano, Marco Antonio; Galosi, Cecilia Monica; Pecoraro, Marcelo Ricardo; Expression of the hemagglutinin HA1 subunit of the equine influenza virus using a baculovirus expression system; Asociación Argentina de Microbiología; Revista Argentina de Microbiología; 45; 4; 10-2013; 222-2280325-75411851-7617CONICET DigitalCONICETenginfo:eu-repo/semantics/altIdentifier/doi/10.1016/S0325-7541(13)70028-2info:eu-repo/semantics/altIdentifier/url/http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0325754113700282info:eu-repo/semantics/openAccesshttps://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/2.5/ar/reponame:CONICET Digital (CONICET)instname:Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas2025-09-29T10:08:28Zoai:ri.conicet.gov.ar:11336/24260instacron:CONICETInstitucionalhttp://ri.conicet.gov.ar/Organismo científico-tecnológicoNo correspondehttp://ri.conicet.gov.ar/oai/requestdasensio@conicet.gov.ar; lcarlino@conicet.gov.arArgentinaNo correspondeNo correspondeNo correspondeopendoar:34982025-09-29 10:08:28.362CONICET Digital (CONICET) - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicasfalse
dc.title.none.fl_str_mv Expression of the hemagglutinin HA1 subunit of the equine influenza virus using a baculovirus expression system
Expresión de la subunidad HA1 del virus de influenza equina utilizando un sistema de expresión en baculovirus
title Expression of the hemagglutinin HA1 subunit of the equine influenza virus using a baculovirus expression system
spellingShingle Expression of the hemagglutinin HA1 subunit of the equine influenza virus using a baculovirus expression system
Sguazza, Guillermo Hernán
Hemagglutinin
Baculovirus
Vaccine
title_short Expression of the hemagglutinin HA1 subunit of the equine influenza virus using a baculovirus expression system
title_full Expression of the hemagglutinin HA1 subunit of the equine influenza virus using a baculovirus expression system
title_fullStr Expression of the hemagglutinin HA1 subunit of the equine influenza virus using a baculovirus expression system
title_full_unstemmed Expression of the hemagglutinin HA1 subunit of the equine influenza virus using a baculovirus expression system
title_sort Expression of the hemagglutinin HA1 subunit of the equine influenza virus using a baculovirus expression system
dc.creator.none.fl_str_mv Sguazza, Guillermo Hernán
Fuentealba, Nadia Analia
Tizzano, Marco Antonio
Galosi, Cecilia Monica
Pecoraro, Marcelo Ricardo
author Sguazza, Guillermo Hernán
author_facet Sguazza, Guillermo Hernán
Fuentealba, Nadia Analia
Tizzano, Marco Antonio
Galosi, Cecilia Monica
Pecoraro, Marcelo Ricardo
author_role author
author2 Fuentealba, Nadia Analia
Tizzano, Marco Antonio
Galosi, Cecilia Monica
Pecoraro, Marcelo Ricardo
author2_role author
author
author
author
dc.subject.none.fl_str_mv Hemagglutinin
Baculovirus
Vaccine
topic Hemagglutinin
Baculovirus
Vaccine
purl_subject.fl_str_mv https://purl.org/becyt/ford/1.6
https://purl.org/becyt/ford/1
dc.description.none.fl_txt_mv Equine influenza virus is a leading cause of respiratory disease in horses worldwide. Disease prevention is by vaccination with inactivated whole virus vaccines. Most current influenza vaccines are generated in embryonated hens´ eggs. Virions are harvested from allantoic fluid and chemically inactivated. Although this system has served well over the years, the use of eggs as the substrate for vaccine production has several well-recognized disadvantages (cost, egg supply, waste disposal and yield in eggs). The aim of this study was to evaluate a baculovirus system as a potential method for producing recombinant equine influenza hemagglutinin to be used as a vaccine. The hemagglutinin ectodomain (HA1 subunit) was cloned and expressed using a baculovirus expression vector. The expression was determined by SDS-PAGE and immunoblotting. A high yield, 20μg/ml of viral protein, was obtained from recombinant baculovirus-infected cells. The immune response in BALB/c mice was examined following rHA1 inoculation. Preliminary results show that recombinant hemagglutinin expressed from baculovirus elicits a strong antibody response in mice; therefore it could be used as an antigen for subunit vaccines and diagnostic tests.
El virus de la infl uenza equina es una de las principales causas de enfermedad respiratoria en caballos de todo el mundo. La prevención de la enfermedad es a través de la vacunación con vacunas a virus inactivado. La mayoría de las vacunas se producen en huevos embrionados, de los cuales los viriones son cosechados del líquido alantoideo e inactivados químicamente. Aunque este sistema ha servido bien durante años, el uso de huevos como sustrato para la producción de vacuna presenta varias desventajas bien reconocidas (costo, provisión de huevos, manejo de los residuos, rinde por huevo). El objetivo del presente trabajo fue evaluar preliminarmente un sistema de expresión en baculovirus como método de producción de hemoaglutinina recombinante (rHA) para ser utilizada como vacuna para la prevención de la infl uenza equina. Para ello el ectodominio de la hemaglutinina (la subunidad HA1) del virus de la infl uenza equina se expresó en células de insecto infectadas con un baculovirus recombinante. La expresión fue demostrada por SDS-PAGE e inmunoblotting. El método empleado fue capaz de producir gran cantidad de rHA1. En este estudio se obtuvieron 20 μg/ml (200 μg de HA1 purifi cada de 2,5x107 células infectadas). La respuesta inmune fue evaluada mediante la inmunización de ratones BALB/c. Los resultados preliminares demostraron que la proteína recombinante expresada en baculovirus genera una fuerte respuesta inmune en ratones, por lo tanto podría ser utilizada como antígeno para la producción de una vacuna a subunidades y en pruebas diagnósticas.
Fil: Sguazza, Guillermo Hernán. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina
Fil: Fuentealba, Nadia Analia. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina
Fil: Tizzano, Marco Antonio. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina
Fil: Galosi, Cecilia Monica. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas; Argentina
Fil: Pecoraro, Marcelo Ricardo. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina
description Equine influenza virus is a leading cause of respiratory disease in horses worldwide. Disease prevention is by vaccination with inactivated whole virus vaccines. Most current influenza vaccines are generated in embryonated hens´ eggs. Virions are harvested from allantoic fluid and chemically inactivated. Although this system has served well over the years, the use of eggs as the substrate for vaccine production has several well-recognized disadvantages (cost, egg supply, waste disposal and yield in eggs). The aim of this study was to evaluate a baculovirus system as a potential method for producing recombinant equine influenza hemagglutinin to be used as a vaccine. The hemagglutinin ectodomain (HA1 subunit) was cloned and expressed using a baculovirus expression vector. The expression was determined by SDS-PAGE and immunoblotting. A high yield, 20μg/ml of viral protein, was obtained from recombinant baculovirus-infected cells. The immune response in BALB/c mice was examined following rHA1 inoculation. Preliminary results show that recombinant hemagglutinin expressed from baculovirus elicits a strong antibody response in mice; therefore it could be used as an antigen for subunit vaccines and diagnostic tests.
publishDate 2013
dc.date.none.fl_str_mv 2013-10
dc.type.none.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/article
info:eu-repo/semantics/publishedVersion
http://purl.org/coar/resource_type/c_6501
info:ar-repo/semantics/articulo
format article
status_str publishedVersion
dc.identifier.none.fl_str_mv http://hdl.handle.net/11336/24260
Sguazza, Guillermo Hernán; Fuentealba, Nadia Analia; Tizzano, Marco Antonio; Galosi, Cecilia Monica; Pecoraro, Marcelo Ricardo; Expression of the hemagglutinin HA1 subunit of the equine influenza virus using a baculovirus expression system; Asociación Argentina de Microbiología; Revista Argentina de Microbiología; 45; 4; 10-2013; 222-228
0325-7541
1851-7617
CONICET Digital
CONICET
url http://hdl.handle.net/11336/24260
identifier_str_mv Sguazza, Guillermo Hernán; Fuentealba, Nadia Analia; Tizzano, Marco Antonio; Galosi, Cecilia Monica; Pecoraro, Marcelo Ricardo; Expression of the hemagglutinin HA1 subunit of the equine influenza virus using a baculovirus expression system; Asociación Argentina de Microbiología; Revista Argentina de Microbiología; 45; 4; 10-2013; 222-228
0325-7541
1851-7617
CONICET Digital
CONICET
dc.language.none.fl_str_mv eng
language eng
dc.relation.none.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/altIdentifier/doi/10.1016/S0325-7541(13)70028-2
info:eu-repo/semantics/altIdentifier/url/http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0325754113700282
dc.rights.none.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/2.5/ar/
eu_rights_str_mv openAccess
rights_invalid_str_mv https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/2.5/ar/
dc.format.none.fl_str_mv application/pdf
application/pdf
application/pdf
application/pdf
application/pdf
dc.publisher.none.fl_str_mv Asociación Argentina de Microbiología
publisher.none.fl_str_mv Asociación Argentina de Microbiología
dc.source.none.fl_str_mv reponame:CONICET Digital (CONICET)
instname:Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas
reponame_str CONICET Digital (CONICET)
collection CONICET Digital (CONICET)
instname_str Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas
repository.name.fl_str_mv CONICET Digital (CONICET) - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas
repository.mail.fl_str_mv dasensio@conicet.gov.ar; lcarlino@conicet.gov.ar
_version_ 1844613952396328960
score 13.070432

Publicaciones similares