Test hipoosmótico combinado a la tinción de Coomassie blue en espermatozoides de llama - Carretero, Maria Ignacia (2019)
La integridad de las membranas plasmática y acrosomal es de gran importancia para determinar la capacidad fertilizante de los espermatozoides. Los objetivos de este trabajo fueron: 1) evaluar la funcionalidad de la membrana plasmática a través del tiempo mediante el test hipoosmótico (HOS) y 2) combinar la técnica de HOS con la tinción de Coomassie Blue (CB) para evaluar simultáneamente la funcionalidad de membrana y la integridad acrosomal en espermatozoides de semen fresco de llama. Se obtuvieron 12 eyaculados de 6 machos mediante electroeyaculación bajo anestesia general. Se realizó el test de endósmosis con y sin fijación en paraformadehído y evaluando a diferentes tiempos de conservación (0 hs sin fijar y 0, 2, 4 y 24 hs fijado). Una alícuota de la muestra fijada se procesó y se tiñó con CB. No se observaron diferencias significativas (p>0,05) en el porcentaje de espermatozoides con membranas funcionales al comparar la muestra no fijada y las muestras preservadas durante diferentes tiempos en la solución de fijación. Tampoco se observaron diferencias significativas (p>0,05) en el porcentaje de endósmosis en las muestras en las que sólo se realizó HOS y en las que se realizó HOS en combinación con CB. Es posible diferir el momento de la evaluación de la funcionalidad de membrana de los espermatozoides de llama mediante la técnica de HOS de la colecta del semen. La técnica dual (HOS + CB) permite evaluar en forma simultánea la funcionalidad de las membranas e integridad acrosomal en espermatozoides de semen fresco de llama, facilitando el trabajo a campo.