Disección funcional de enhancers transcripcionales específicos del gen del receptor de dopamina D2 (Drd2) mediante el uso de ratones transgénicos - Lorenzo Lopez, Juan Ramiro (2015)
El receptor de dopamina D2 (D2R) juega un rol fundamental en la integración de respuestas motoras, emocionales y cognitivas y está involucrado en enfermedades neurológicas y psiquiátricas de alta prevalencia, que incluyen la enfermedad de Parkinson, la esquizofrenia y la administración compulsiva de drogas de abuso. A pesar de su importancia, los mecanismos moleculares que controlan la expresión de Drd2 en los distintos tipos celulares son desconocidos. En este trabajo realizamos un estudio de las regiones conservadas presentes en el locus de Drd2 con el objetivo de investigar si dirigen la expresión de transgenes reporteros en diferentes áreas y tipos celulares del cerebro y de la hipófisis del ratón. Mediante el uso de cromosomas artificiales bacterianos (BAC) recombinantes generamos inicialmente ratones transgénicos portadores de construcciones de gran tamaño que permitieron identificar una región de 60 kb que dirige la expresión de un gen reportero a distintos tipos neuronales y celulares donde normalmente se expresa Drd2. A partir de esa información realizamos una disección genética y funcional de esta región de 60 kb. Un fragmento de 15 kb, que incluye el primer exón de Drd2, y otro de 7 kb, localizado en extremo 3? del primer intrón, dirigen la expresión de genes reporteros a diferentes áreas del cerebro. Mientras la primera tiene como área de dominio principal al septum lateral, la segunda activa la expresión en el núcleo estriado y en las áreas dopaminérgicas del cerebro medio. En este último fragmento identificamos dos elementos conservados de aproximadamente 500 pares de bases, que funcionan como enhancers transcripcionales, dirigiendo la expresión reportera a distintas poblaciones neuronales, uno a neuronas estriatales y el otro a neuronas pertenecientes al cerebro medio. Estos resultados constituyen un paso fundamental para comprender el código de elementos regulatorios que controlan la expresión de Drd2 y aporta nuevas herramientas genéticas para estudiar la participación del D2R en diferentes tipos celulares y circuitos neuronales.