ATP release depends on autophagic stimulation and rab21 in hela cells

Autores
Barbosa, María Carolina; Nola, Sébastien; Galli, Thierry; Colombo, Maria Isabel; Fader Kaiser, Claudio Marcelo
Año de publicación
2019
Idioma
inglés
Tipo de recurso
documento de conferencia
Estado
versión publicada
Descripción
ATP exocytosis has emerged as an important autocrine/paracrine signal to trigger responses regarding platelet aggregation, inter-astrocytes communication, cell migration, differentiation, etc. The molecular mechanisms underlying this process have not been well defined so far. In addition, autophagy-dependent ATP release was shown to be an important process involved in immunogenic cell death and inflammation. Autophagic exocytosis has been also implicated in IL-1β, IL-18, galectin-3 secretion and antigens presentation to the major histocompatibility complex. The regulation of this process is poorly understood. Our group has previously shown that there is an important role of the v-SNARE protein VAMP7 in the autophagic ATP exocytosis. Since there is a close connection between VAMP7, the small GTP-ase Rab21 and autophagy we decided to investigate the role of this Rab protein, its guanine-nucleotide exchange factor VARP and another Rab related to VARP (Rab32) in the autophagic exocytosis of ATP. HeLa cells were transiently transfected with GFP-Vector, YFP-Rab32wt, YFP-Rab32T39N (negative dominant mutant), GFP-Rab21wt, GFP-Rab21T33N (negative dominant mutant) and/or RFP-LC3. Then we incubated this cells in full medium, resveratrol 50nM and rapamycin 50nM for 4 hours or starvation medium for 2 hours. We used LC3B or VARP antibodies to detect endogenous proteins. Lysotracker red was put 30 minutes before the incubation finished. For ATP release assays, we used the luciferin-luciferase kit to measure the amounts of ATP in the extracellular medium. We took samples at 0, 30, 60, 90, 120, 180 and 240 minutes after the autophagic stimulus began. We found that autophagy leads to a redistribution of Rab32 or Rab21 molecules to the cell periphery, where they colocalized with LC3 and VARP. ATP release was significantly increased in starvation and in less content in resveratrol condition. Our results suggest a role for Rab21, Rab32 and VARP in the autophagic exocytosis of ATP.
Fil: Barbosa, María Carolina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Histología y Embriología de Mendoza Dr. Mario H. Burgos. Universidad Nacional de Cuyo. Facultad de Ciencias Médicas. Instituto de Histología y Embriología de Mendoza Dr. Mario H. Burgos; Argentina
Fil: Nola, Sébastien. Centre National de la Recherche Scientifique; Francia. Institut Jacques Monod; Francia
Fil: Galli, Thierry. Centre National de la Recherche Scientifique; Francia. Institut Jacques Monod; Francia
Fil: Colombo, Maria Isabel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Histología y Embriología de Mendoza Dr. Mario H. Burgos. Universidad Nacional de Cuyo. Facultad de Ciencias Médicas. Instituto de Histología y Embriología de Mendoza Dr. Mario H. Burgos; Argentina
Fil: Fader Kaiser, Claudio Marcelo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Histología y Embriología de Mendoza Dr. Mario H. Burgos. Universidad Nacional de Cuyo. Facultad de Ciencias Médicas. Instituto de Histología y Embriología de Mendoza Dr. Mario H. Burgos; Argentina
LXII Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; LIII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Bioquímica y Biología Molecular; LXV Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología; Reunión de la Sociedad Argentina de Andrología; XLVI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica ; XLIX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Farmacología Experimental; Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Fisiología; Reunión de la Sociedad Argentina de Hematología; XXIX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología
Ciudad Autónoma de Buenos Aires
Argentina
Sociedad Argentina de Investigación Clínica
Sociedad Argentina de Investigación Bioquímica y Biología Molecular
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Materia
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Nivel de accesibilidad
acceso abierto
Condiciones de uso
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Repositorio
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Institución
Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas
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Our group has previously shown that there is an important role of the v-SNARE protein VAMP7 in the autophagic ATP exocytosis. Since there is a close connection between VAMP7, the small GTP-ase Rab21 and autophagy we decided to investigate the role of this Rab protein, its guanine-nucleotide exchange factor VARP and another Rab related to VARP (Rab32) in the autophagic exocytosis of ATP. HeLa cells were transiently transfected with GFP-Vector, YFP-Rab32wt, YFP-Rab32T39N (negative dominant mutant), GFP-Rab21wt, GFP-Rab21T33N (negative dominant mutant) and/or RFP-LC3. Then we incubated this cells in full medium, resveratrol 50nM and rapamycin 50nM for 4 hours or starvation medium for 2 hours. We used LC3B or VARP antibodies to detect endogenous proteins. Lysotracker red was put 30 minutes before the incubation finished. For ATP release assays, we used the luciferin-luciferase kit to measure the amounts of ATP in the extracellular medium. 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Institut Jacques Monod; FranciaFil: Colombo, Maria Isabel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Histología y Embriología de Mendoza Dr. Mario H. Burgos. Universidad Nacional de Cuyo. Facultad de Ciencias Médicas. Instituto de Histología y Embriología de Mendoza Dr. Mario H. Burgos; ArgentinaFil: Fader Kaiser, Claudio Marcelo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Histología y Embriología de Mendoza Dr. Mario H. Burgos. Universidad Nacional de Cuyo. Facultad de Ciencias Médicas. Instituto de Histología y Embriología de Mendoza Dr. Mario H. Burgos; ArgentinaLXII Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; LIII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Bioquímica y Biología Molecular; LXV Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología; Reunión de la Sociedad Argentina de Andrología; XLVI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica ; XLIX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Farmacología Experimental; Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Fisiología; Reunión de la Sociedad Argentina de Hematología; XXIX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de ProtozoologíaCiudad Autónoma de Buenos AiresArgentinaSociedad Argentina de Investigación ClínicaSociedad Argentina de Investigación Bioquímica y Biología MolecularSociedad Argentina de InmunologíaSociedad Argentina de AndrologíaSociedad Argentina de BiofísicaSociedad Argentina de BiologíaSociedad Argentina de Farmacología ExperimentalSociedad Argentina de FisiologíaSociedad Argentina de HematologíaSociedad Argentina de ProtozoologíaFundación Revista Medicina2019info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/conferenceObjectReuniónJournalhttp://purl.org/coar/resource_type/c_5794info:ar-repo/semantics/documentoDeConferenciaapplication/pdfapplication/pdfapplication/pdfapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/11336/215621ATP release depends on autophagic stimulation and rab21 in hela cells; LXII Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; LIII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Bioquímica y Biología Molecular; LXV Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología; Reunión de la Sociedad Argentina de Andrología; XLVI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica ; XLIX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Farmacología Experimental; Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Fisiología; Reunión de la Sociedad Argentina de Hematología; XXIX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología; Ciudad Autónoma de Buenos Aires; Argentina; 2017; 261-2610025-76801669-9106CONICET DigitalCONICETenginfo:eu-repo/semantics/altIdentifier/url/https://medicinabuenosaires.com/revistas/vol77-17/Vol.77SuplementoI-2017.pdfInternacionalinfo:eu-repo/semantics/openAccesshttps://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/ar/reponame:CONICET Digital (CONICET)instname:Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas2025-09-03T10:10:55Zoai:ri.conicet.gov.ar:11336/215621instacron:CONICETInstitucionalhttp://ri.conicet.gov.ar/Organismo científico-tecnológicoNo correspondehttp://ri.conicet.gov.ar/oai/requestdasensio@conicet.gov.ar; lcarlino@conicet.gov.arArgentinaNo correspondeNo correspondeNo correspondeopendoar:34982025-09-03 10:10:55.647CONICET Digital (CONICET) - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicasfalse
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Fil: Barbosa, María Carolina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Histología y Embriología de Mendoza Dr. Mario H. Burgos. Universidad Nacional de Cuyo. Facultad de Ciencias Médicas. Instituto de Histología y Embriología de Mendoza Dr. Mario H. Burgos; Argentina
Fil: Nola, Sébastien. Centre National de la Recherche Scientifique; Francia. Institut Jacques Monod; Francia
Fil: Galli, Thierry. Centre National de la Recherche Scientifique; Francia. Institut Jacques Monod; Francia
Fil: Colombo, Maria Isabel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Histología y Embriología de Mendoza Dr. Mario H. Burgos. Universidad Nacional de Cuyo. Facultad de Ciencias Médicas. Instituto de Histología y Embriología de Mendoza Dr. Mario H. Burgos; Argentina
Fil: Fader Kaiser, Claudio Marcelo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Histología y Embriología de Mendoza Dr. Mario H. Burgos. Universidad Nacional de Cuyo. Facultad de Ciencias Médicas. Instituto de Histología y Embriología de Mendoza Dr. Mario H. Burgos; Argentina
LXII Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; LIII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Bioquímica y Biología Molecular; LXV Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología; Reunión de la Sociedad Argentina de Andrología; XLVI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica ; XLIX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Farmacología Experimental; Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Fisiología; Reunión de la Sociedad Argentina de Hematología; XXIX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología
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