Estudio de la sobre-expresión y topología de BlaR1 y MecR1 de staphylococcus aureus - Mihovilcevic, Damila (2018)
Las proteínas de membrana sensoras/transductoras BlaR1 y MecR1, están involucradas en la inducción de la resistencia a antibióticos β-lactámicos en cepas de staphylococcus aureus resistentes a meticilina (MRSA). La función de estas proteínas está relacionada con la detección del antibiótico presente en el medio y la transmisión de una señal hacia el interior celular desencadenando la manifestación de resistencia. El diseño de inhibidores que permitan bloquear la activación de MecR1 y BlaR1, permitiendo revertir el fenotipo resistente, se ha visto dificultado principalmente por la imposibilidad de sobre-expresar y purificar a estas proteínas para un posterior estudio estructural que permita elucidar el mecanismo de la transducción de señal. Por lo tanto, en el presente trabajo, se evaluó la sobre-expresión de diferentes versiones de BlaR1 y MecR1. Se logró sobre-expresar la proteína BlaR1JH1, una versión trunca de la proteína BlaR1, presente en la cepa de S. aureus JH1 resistente a β-lactámicos, como fusión a la proteína Mistic. Se verificó su localización en membrana y se puso a punto la solubilización y purificación de la misma. Además, pudo demostrarse la localización extracelular del dominio sensor en esferoplastos de E. coli BL21StarTM (DE3). Podríamos decir, que se ha logrado por primera vez en diez años de trabajo, sobre-expresar en membrana una de las versiones más largas reportadas de la proteína BlaR1 y demostrar que posee un dominio sensor funcional. También, se ha logrado sobre-expresar el dominio gluzincina de la metaloproteasa MecR1 (aminoácidos R147-Y304). Este dominio contiene el sitio activo de la misma y se probó que se localiza en membrana al ser expresado en E. coli. Además el mismo pudo ser solubilizado y purificado