Interacción del virus Junín con el citoesqueleto y la membrana de la célula huésped - Cordo, Sandra Myriam (2004)
EI virus Junín (JUNV), agente etiológico de la fiebre hemorrágica argentina, esun miembro de la familia Arenaviridae. Es un virus envuelto de genoma ARNsegmentado cuyo ciclo de replicación ha sido caracterizado en varios aspectos. Laentrada a las células blanco se realiza vía endocitosis mediada por receptor y posteriorfusión dependiente de PH. Una vez que la nucleocápside se encuentra dentro delcitoplasma se expresan 5 proteínas estructurales, mediante una estrategia decodificación ambisense. La proteína mayoritaria asociada a la nucleocápside esdenominada NP. A partir de un único precursor glicoproteico (GPC), sintetizado en elretículo y exportado a la membrana plasmática de la célula, se obtienen dosglicoproteínas virales denominadas GP1 y GP2. Ambas conforman las estructurasclaviformes encontradas en la envoltura viral. Se desconocen hasta el momento losmecanismos detallados y las estructuras celulares involucradas en el transporte de lasdistintas proteínas virales hacia el sitio de brotación. El ensamblado de las partículasvirales se lleva a cabo en la membrana plasmática de las células infectadas. En este trabajo se estudiaron algunos aspectos de la interacción virus-célulahuésped, caracterizando la asociación de NP, GPC y GP1 a distintas estructurascelulares. En primer lugar se estudió la interacción del virus con la red de filamentosintermedios (FI) del citoesqueleto. Se utilizó el compuesto acrilamida capaz dedesorganizar específicamente los FI. La producción de virus infeccioso disminuyó demanera dosis-dependiente en presencia del mismo. Los resultados, observados encelulas Vero, cultivos de fibroblastos humanos y astrocitos murinos, fueroncomparables. Se analizó luego el efecto del compuesto sobre diferentes pasos delciclo de multiplicación. De esta manera se determinó que la integridad de los FI escrucial al menos durante los pasos previos a la síntesis de proteínas virales yposteriores a la internalización. Mediante extracciones específicas realizadas condetergentes no iónicos se encontró que NP se asocia a la fracción celularcorrespondiente al citoesqueleto, aunque no se determinó a que componentecorrespondería esta interacción. Las glicoproteínas no mostraron asociación específicaa estas fracciones celulares en iguales condiciones. Por otro lado, modificaciones en el contenido de colesterol de las célulasinfectadas y tratadas con inhibidores de la enzima HMG-CoA reductasa, disminuyeronla infectividad y localización de las glicoproteinas en la membrana de las mismas. Estos resultados llevaron al análisis de la asociación de GPC y GP1 a estructuras demembrana ricas en colesterol denominadas rafts. Los ensayos de fraccionamientocelular específicos para estos microdominios de membrana mostraron la localizaciónde las glicoproteínas en rafts. Esta interacción fue dependiente de la temperatura y dela presencia de colesterol en los cultivos infectados. Además, la asociación de lasglicoproteínas a las fracciones rafts fue estabilizada a 37°C por la adición deanticuerpos específicos. Estos resultados sugieren la utilización de esta vía comomecanismo de transporte para GPC y GP1 a la membrana celular de las célulasinfectadas. Asimismo la localización de las glicoproteínas en los microdominios raftspodría representar una estrategia para el reclutamiento de los componentes viralesprevio al paso de liberación de la progenie en las células infectadas.