TNF-alfa y modulación del fenómeno apoptótico en neutrófilos humanos

• Autores: Salamone, Gabriela V.
• Año de publicación: 2003
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Geffner, Jorge; Trevani, Analía Silvina
• Institución: Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

El presente trabajo examinó la capacidad del TNF-a. de modular la apoptosis deneutrófilos humanos. Observamos que los neutrófilos cultivados sólo con TNF-a.sufren unpequeño pero significativo incremento en sus porcentajes de apoptosis. Llamativamente.observamos además que aquellos neutrófilos pretratados con TNF-a por 1-2 minutos a 37°C y expuestos luego a una variedad de agentes tales como IgG inmovilizada (IgGi),eritrocitos recubiertos por anticuerpos lgG (lgG-E), eritrocitos tratados con complemento (EC), zimosán (Z), ácido forbol miristico (PMA), suero activado por zimosán (ZAS), N-formilmetionil-leucil-fenilalanina (fMLP), Escherichia coli, y factor estimulador de laformación de colonias para granulocitos y macrófagos (GM-CSF) por 3 horas a 37°C,experimentaron un marcado incremento en sus porcentajes de apoptosis. Resultadossimilares fueron obtenidos en neutrófilos pretratados con TNF-a por 30 minutos, 1, 3 y 18horas. Las concentraciones a las cuales el TNF-a. medió este efecto promotor de laapoptosis se hallaron comprendidas entre 1 y 100 nglml. En contraste con lasobservaciones realizadas en neutrófilos pretratados con TNF-a, no observamospromoción alguna de la apoptosis cuando el TNF-a fue añadido a neutrófilos previamenteactivados por agonistas convencionales. Las experiencias realizadas a fin de determinarel mecanismo responsable de la promoción de apoptosis por TNF-a mostraron que elmismo no es dependiente de la generación de intermediarios reactivos del oxígeno (IRO)ní de la participación del sistema Fas/FasL. Por el contrario, pareciera involucrar laactivación de las vias intrínseca y extrinseca del mecanismo apoptótico y asociarse a unadramática disminución en la expresión de la proteina anti-apoptótica Mol-1. Nuestrosresultados sugieren que el TNF-a juega un papel critico en el control de la sobrevida delneutrófilo en virtud de su capacidad de inducir la puesta en marcha del procesoapoptótioo, proceso que es 'gatillado' por una amplia variedad de agonistasconvencionales.
This work examined the ability of TNF-a to modulate human neutrophil apoptosis. Neutrophils cultured with TNF-a alone undergo a low but significant increase in thenumber of apoptotic cells. More interestingly, when neutrophils were pretreated with TNFa.for 1-2 min at 37°C, and then were exposed to a variety of agents such as immobilizedlgG (ilgG), IgG-coated erythrocytes (lgG-E), complement-treated erythrocytes (CE),zymosan (Z), phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA),zymosan-activated serum (ZAS), N-formylmethionyl-leucyl-phenylalanine (fMLP), Escherichia coli, and granulocytemacrophagecolony-stimulating factor (GM-CSF) for 3 h at 37°C, a marked stimulation ofapoptosis was observed. Similar results were obtained in neutrophils pretreated with TNFafor 30 min, 1 h, 3 h, and 18 h. Bose-dependent studies showed that TNF-a enhancesneutrophil apoptosis at oonoentrations ranging from 1 to 100 ng/ml. ln contrast to theobservations made in neutrophils pretreated with TNF-a, there was no stimulation ofapoptosis when TNF-a was added to neutrophils previously activated by conventionalagonists. Experiments performed to establish the mechanism through which TNF-apromotes neutrophil apoptosis showed that: a) it was not dependent on the generation ofreactive oxygen interrnediates (ROI) nor the participation of the Fas/FasL system, b) itappears to involve the activation of both, the extrinsic and ¡ntn'nsicpathway of apoptosis,and c) it was associated to a dramatic down regulation of the expression of anti-apoptoticprotein Mol-1. Our results suggest that TNF-a plays a critical role in the control ofneutrophil survival by virtue of its ability to induce an apoptotic death program which couldbe tiiggered by a variety of conventional agonists.
Fil: Salamone, Gabriela V.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.