Angiotensina II en la hipófisis normal e hiperplásica - González Iglesias, Arturo E. (2001)
La presencia de todos los componentes del sistema renina-angiotensina (RAS) en la adenohipófisis hasugerido que el componente activo de este sistema, el octapéptido Angiotensina II (AngII), actuaría endicha glándula como un factor autócrino o parácrino. Aún cuando se ha demostrado que AngII liberaprolactina (PRL) y adrenocorticotrofina (ACTH) tanto in vivo como in vitro a través de sus receptores detipo l (ATl), sc ignora todavía la relevancia fisiológica dc estos efectos. El objetivo de esta Tesis fueestudiar la participación del octapéptido cn la función hipofisaria normal y cómo la misma puedealterarse por procesos patológicos característicos dc la glándula. Con tal motivo, los ensayos serealizaron en adenohipófisis de ratas hembra adultas normales y en dos modelos experimentales deadenomas hipofisarios prolactinosecretantes (prolactinomas). Dado que AngII es un secretagogo de PRLutilizamos como parametros de estudio diferentes aspectos del proceso prolactinoliberador de AngII,incluyendo su mecanismo de transducción de señales (especialmente la señalización de Ca2+i y lossubtipos receptores del octapéptido involucrados en el mismo. En una primera caracterización de los efectos de AngII en adenohipófisis de rata normal (grupo control, CON), demostramos que la producción de inositol trifosfato (IP3), la movilización de Ca2+i y la liberaciónde PRL inducidas por AngII sufren una rápida y prolongada desensibilización homóloga y heteróloga. Asimismo, puesto que el Ca2+i es un factor esencial para la secreción hormonal y la proliferación ydiferenciación celular, ampliamos nuestro estudio del mecanismo de señalización intracelular del Ca2+i enla hipófisis normal y lo comparamos en detalle con los modelos experimentales mencionados. En experimentos de cultivo primario de células adenohipofisarias y ensayos de señalización de [Ca2+]iobservamos que AngII libera PRL a concentraciones fisiológicas en la hipófisis normal (grupo CON) através de una respuesta de [Ca2+]i bifásica, la cual se compone de una espiga inicial dependiente de lamovilización del contenido de Ca2+ de reservorios intracelulares sensibles a tapsigargina e IP3 y una faseposterior de meseta dependiente del influjo de Ca2+e. En contraste, el efecto prolactinoliberador del octapéptido se encuentra significativamente disminuido encélulas adenohipofisarias provenientes de prolactinomas inducidos mediante el tratamiento crónico invivo con dietilstilbestrol (grupo DES). Además de la disminución del número de receptores hipofisarios AT1 ya descripta en este modelo experimental, la atenuación del efecto prolactinoliberador deloctapéptido en estas células se encontró asociada con una profunda alteración de su patrón deseñalización de [Ca2+]i, que se caracterizó por la ausencia completa de la fase inicial de espiga de [Ca2+]iy la presencia de una señal monofásica de tipo meseta enteramente dependiente del influjo de Ca2+e ymediada parcialmente por canales de calcio dependientes del voltaje tipo L (VDCC). A pesar de estasmodificaciones, las respuestas fueron mediadas por el mismo subtipo receptor (AT1) en ambos gruposexperimentales. En otros ensayos, demostramos la especificidad de la alteración de la señal de Ca2+i en respuesta al estímulo de AngII, cuyo patrón característico fue reproducido en prolactinomas de ratonescon deficiencia funcional del receptor dopaminérgico D2. Por otra parte, dado que se ha descripto que el octapéptido actúa como factor angiogénico y mitogénicoen varios tejidos, evaluamos la capacidad de AngII para inducir la proliferación y la activación dep44/p42 en células adenohipofisarias normales e hiperplásicas. Experimentos de incorporación de 3 [3H]-timidinaindicaron que el octapéptido no promueve la proliferación celular en células adenohipofisariastanto normales (grupo CON) como hiperplásicas (grupo DES), a pesar de que dicho agonista estimulasignificativamente la actividad de p44/p42 en ambos grupos. El tratamiento in vivo de las ratas estrogenizadas con el agonista dopaminérgico D2, bromocriptina (DES+Bro), retornó parcialmente la prolactinemia a niveles normales e indujo una marcada regresión delos prolactinomas, si bien no fue evidente una recuperación del contenido hipofisario de PRL. Larecuperación parcial de los parámetros in vivo se correlacionó con una restauración paralela de lasecreción de PRL y la espiga de Ca2+i inducidas in vitro por AngII en células hipofisarias de este grupo. Inesperadamente, el tratamiento in vivo de la hiperplasia hipofisaria con progesterona (grupo DES+P4)potenció el efecto prolactinoliberador del octapéptido a través de un mecanismo sinérgico entre losreceptores AT1 y AT2, a pesar de que dicho progestágeno no revirtió ni la hiperprolactinemia ni eltamaño de los tumores. Resultados de Western Blot indicaron por primera vez la presencia de losreceptores AT2 en la adenohipófisis, cuya expresión se encontró marcadamente aumentada en los gruposhiperplásicos (DES y DES+P4). Por otra parte, cuando la hiperplasia fue revertida con el tratamiento invivo con bromocriptina (DES+Bro), la expresión del receptor AT2 disminuyó hasta recuperar el nivelexpresado en el grupo control. Ninguno de los cotratamientos empleados (bromocriptina o P4) indujocambios en la baja expresión de los receptores AT1 característica del grupo DES. En conclusión, los presentes estudios en modelos animales de prolactinoma indicarían la existencia deuna compleja interrelación entre el RAS hipofisario, el sistema dopaminérgico, y los esteroides ováricosen la función hipofisaria. Modificaciones en esta delicada red de interacciones, podrían explicar laalteración del comportamiento hipofisario frente a ciertos secretagogos como AngII. Los resultadosobtenidos son compatibles con la hipótesis de una activación del RAS hipofisario durante el proceso dehiperplasia y podrían ser de potencial interés en diversas áreas de la farmacoterapia como el tratamientode prolactinomas resistentes o no a agonistas D2, el tratamiento hormonal de reemplazo en lapostmenopausia y el tratamiento de enfermedades cardiovasculares como la insuficiencia cardíaca y lahipertensión.