Receptor nicotínico colinérgico alfa9alfa10 : propiedades funcionales y farmacológicas - Boffi, Juan Carlos (2014)
La activación del receptor nicotínico colinérgico α9α10 presente en los contactos sinápticos entre las fibras colinérgicas eferentes olivococleares y las células ciliadas delórgano de Corti puede prevenir el trauma acústico. En consecuencia, incrementar suactivación mediante el uso de potenciadores farmacológicos, conocer las condiciones enlas cuales este receptor alcanza una activación óptima o estudiar su mecanismo deactivación, podría tener un potencial valor terapéutico para la prevención de la pérdidade audición causada por exposición a intensidades altas de sonido. Por lo tanto, losobjetivos de este trabajo fueron: caracterizar nuevos moduladores positivos para el receptor α9α10, estudiar las condiciones en las que alcanza una activación óptima ydescribir los requerimientos estructurales para su activación. En relación a la búsqueda de potenciadores farmacológicos, en este trabajo caracterizamos al ácido ascórbico (ASC) como modulador positivo de receptoresrecombinantes α9α10 expresados en oocitos de Xenopus laevis, mediante fijado de voltaje con dos electrodos. Evidenciamos que la potenciación por ASC de α9α10 noafecta la afinidad aparente por acetilcolina (ACh) ni la sensibilidad al voltaje del receptor, pero si incrementa significativamente las amplitudes máximas de corrienteevocada. Este efecto es estereo específico de la forma L y reducida de ASC. Nuestros resultados sugieren que el mecanismo de potenciación involucraría una interacción alostérica estereo específica. Para caracterizar las condiciones en las cuales el receptor α9α10 alcanza una activación óptima, estudiamos la influencia del Ca2+ extracelular en la activación delreceptor recombinante α9α10. Este receptor es potenciado a concentraciones sub-mMde Ca2+ y es bloqueado a concentraciones superiores. La incorporación de la subunidad α10 al pentámero es responsable de la potenciación a concentraciones sub-mM de Ca2+. Mediante mutagénesis dirigida y generación de receptores quiméricos, evidenciamosque las interfaces entre los dominios extracelulares de una subunidad α9 y otra α10adyacente son clave en este proceso. Finalmente, estudiamos el proceso de activación de receptores recombinantes α9α10, caracterizando la importancia de cada subunidad en la formación de sitios de unión a ACh funcionales. Evidenciamos que los componentes principales del sitio deunión a ACh de tanto las subunidades α9 como de las α10 son necesarios para laactivación del receptor α9α10 y que los componentes complementarios de α9 son indispensables para este proceso.