Rol de la RNA polimerasa II en la regulación del splicing alternativo de genes eucariotas - De La Mata, Manuel (2006)
La transcripción y el procesamiento del mRNA ocurren coordinadamente en la célula. La RNA polimerasa II (pol II) se halla en el centro de este acoplamiento y puede dirigir tanto la síntesis de mensajeros como su procesamiento simultáneo. En esta tesis se estudiaron dos modos generales de regulación del splicing alternativo en los cuales la pol II juega un papel central. Demostramos que una mutante lenta de pol II afecta el splicing alternativo tanto de genes transfectados transitoriamente como de genes endógenos. Esto constituye una prueba directa del control de la elongación sobre el splicing alternativo in vivo. Por otro lado se encontró que el dominio carboxilo terminal (CTD) de la pol II regula el splicing alternativo del exón EDI de la fibronectina. Se demostró que el CTD es necesario para que una proteína de la familia SR, SRp20, ejerza su acción negativa sobre la inclusión de EDI, mientras que la acción estimulante sobre la inclusión de EDI de otra proteína SR, SF2/ASF, es independiente del CTD. Esto sugiere que el CTD actúa reclutando a SRp20 y no a SF2/ASF a la proximidad de EDI, llevando a la exclusión del mismo. Se sabe que la fosforilación del CTD controla la elongación de la pol II. Sin embargo, el efecto inhibitorio de SRp20 persiste cuando la elongación se encuentra reducida en presencia de la pol II lenta o por la droga DRB. Estos resultados sugieren que la elongación y el reclutamiento de factores de splicing contribuyen independientemente al control transcripcional del splicing alternativo.