Expresión de antígenos derivados del virus de la fiebre aftosa en diferentes sistemas eucarióticos - Taboga, Oscar Alberto (2000)
La fiebre aftosa es una enfermedad de gran importancia económica que afectaprincipalmente al ganado bovino. Esta enfermedad está causada por unpicornavirus, el virus de la fiebre aftosa (VFA). El control de la enfermedad se llevaa cabo mediante eliminación de los animales infectados y vacunación con vacunasbasadas en virus inactivado. Existen varias desventajas relacionadas con laproducción y el uso de tales vacunas, entre las que están la reintroducción de laenfermedad debida a la manipulación de grandes masas virales o a la incorrectainactivación del virus, por lo que el desarrollo de vacunas recombinantes másseguras aparece como una alternativa de gran interés. En el presente trabajo seestudió la posibilidad de expresar sitios antigénicos simples y complejos derivadosdel VFA en diferentes sistemas de expresión. La poliproteína P1, precursora de lasproteínas estructurales del virus, pudo expresarse con éxito en un sistemabacteriano y en el sistema “baculovirus-células de insecto”. Sin embargo, lasdiferentes versiones de esta proteína no fueron capaces de montar una respuestaefectiva contra el VFA,probablemente debido a un incorrecto plegamiento espacial. Por otro lado, el sitio antigénico inmunodominante (sitio A) presente en el loop V-Hde la proteína VP1 se expresó con éxito como fusión a la proteína transportadoracore del virus de la hepatitis B (VHB) en células de insecto infectadas conbaculovirus recombinantes. Esta proteína quimérica no adoptó Ia estructuramultimérica esperada, la que se consiguió mediante coinfecciones con unbaculovirus que expresaba la proteína core. De todos modos, las partículasobtenidas resultaron pobres inmunógenos cuando se inyectaron en animalesexperimentales, hecho debido probablemente a la baja densidad de epitopesderivados del VFA en las preparaciones vacunales. Finalmente, tanto el sitio A como la poliproteína P1 pudieron expresarse comofusión a la glicoproteína gp64 del baculovirus AcNPV. Estas proteínas quiméricasse localizaron tanto en la membrana de células infectadas como en la superficie delos baculovirus recombinantes. Esta localización asegura una conformación particulada sobre un soportefosfolipídico (características relacionadas con el aumento de inmunogenicidad desitios antigénicos) y facilita la purificación de los inmunógenos. Cuando sevacunaron ratones con estas construcciones, los baculovirus llevando el sitio A ylas células infectadas con éstos despertaron una respuesta inmune humoralneutralizante contra el VFA, aún en ausencia de adyuvantes. De nuevo, lasconstrucciones llevando P1 fallaron para montar una respuesta inmune humoralneutralizante, probablemente debido a un incorrecto plegamiento espacial. La posibilidad de producir baculovirus recombinantes y células infectadas quelleven en sus superficies sitios antigénicos derivados de patógenos de interésveterinario mediante infección de larvas puede convertirse en una manera sencilla yeconómica de producción de vacunas de nueva generación.