Clonado, caracterización y estudios funcionales de las enzimas poli (ADP-ribosa)polimerasa y poli (ADP-ribosa) glicohidrolasa de Trypanosoma brucei - Schlesinger, Mariana (2015)
El metabolismo de polímeros de ADP-ribosa (PAR) está involucrado en múltiplesfunciones celulares, como la señalización y reparación del ADN, el mantenimiento dela integridad genómica, la decisión entre la supervivencia y muerte celular y elmecanismo de muerte. Poli(ADP-ribosa)polimerasa (PARP) y poli(ADPribosa)glicohidrolasa (PARG) son las proteínas involucradas en esta vía metabólica. PARP es la enzima encargada de sintetizar al polímero, mientras que PARG esresponsable de su degradación. En Trypanosoma brucei ambas proteínas,denominadas TbPARP y TbPARG, son codificadas por un gen de copia única. En lapresente tesis se muestra la caracterización de la actividad de TbPARP in vitro en lareacción de PARilación. Estudios funcionales de TbPARP y TbPARG en el contextodel parásito permitieron identificar su localización subcelular en condiciones normalesy de estrés oxidativo. También se describe aquí la cinética de aparición de PAR en elnúcleo. Mediante la obtención de líneas transgénicas de parásitos procíclicos sobreexpresantesde TbPARP y silenciados (ARNi) para ambas enzimas se realizaronensayos de supervivencia a distintas concentraciones del agente genotóxico H2O2. Losmismos presentaron diferentes grados de citotoxicidad y variaciones en el mecanismode muerte celular de acuerdo a la presencia o ausencia de polímero en el núcleo. También se estudió el efecto de la acumulación nuclear del polímero sobre laprogresión del ciclo celular en cultivos transgénicos sincronizados.