Análisis estructural y bioquímico de la proteína de membrana externa GumB de Xanthomonas campestris, y su participación en la síntesis del exopolisacárido xantano - Jacobs, Melisa (2014)
Muchas bacterias producen polisacáridos extracelulares que pueden asociarse a lasuperficie celular o ser secretados al medio extracelular. Numerosos polisacáridosbacterianos se encuentran asociados al desarrollo de patogenicidad, convirtiéndose enun importante factor de virulencia. Por otro lado, existe un gran interés industrial sobremuchos polisacáridos bacterianos debido a sus amplias aplicaciones. En general, se ha descripto en detalle los primeros pasos de la síntesis depolisacáridos, pero aún no se han esclarecido los mecanismos involucrados en lapolimerización y transporte de los mismos hacia la superficie bacteriana o al medioextracelular. Se ha postulado que estos procesos serían llevados a cabo gracias a laformación de complejos proteicos que podrían atravesar la membrana plasmática, deforma similar a lo observado para los sistemas de secreción de proteínas. En esta tesis se presenta el estudio estructural y bioquímico de la proteína demembrana externa GumB, la cual se encontraría asociada a la síntesis/secreción delpolisacárido xantano en Xanthomonas campestris. Fue posible sobreexpresar ypurificar cantidades suficientes para ensayos estructurales de esta proteína demembrana, al expresarla en el citoplasma. Se obtuvieron cristales de la proteína nativay de su derivado de selenio-metionina, a partir de los cuales fue posible resolver laestructura a 2,54 Å. Se encontró que en el cristal GumB forma un tetrámero, estacaracterística también se ha observado en solución mediante ensayos de dispersiónde luz estática y entrecruzamiento químico. Por otro lado, ensayos de dispersión deneutrones a bajos ángulos mostraron que la forma de GumB en solución es similar a laobservada en el cristal. El tetrámero de GumB mostró una gran cavidad con cargaspositivas que podrían estar involucradas en la interacción con el xantano, el cualposee cargas negativas debido a sus residuos de ácido glucurónico y grupos cetalpiruvato. Asimismo, se presenta evidencia que sugiere la participación de GumB en un complejoproteico. Mediante ensayos de entrecruzamiento químico in vivo se observó que GumB forma complejos de alto peso molecular. Electroforesis azul nativa permitióidentificar potenciales interacciones entre GumB y otras proteínas de X. campestris.