Brucella abortus : tipificación molecular por MLVA en aislamientos locales, análisis in silico de sus lipoproteínas e implicancia de las lipoproteínas en virulencia - Hollender, Daiana (2015)
La brucelosis es una enfermedad zoonótica de distribución mundial, con un altoimpacto en la salud pública y en la economía. De las 10 especies de Brucellareconocidas, B. abortus es la causante de la brucelosis bovina. La publicación delgenoma de varias especies de Brucella facilitó el diseño de distintos esquemasbasados en marcadores moleculares. El objetivo de la primera parte de la tesis fueemplear un esquema de análisis multilocus de VNTR (Multiple Locus VNTR Analysis, MLVA) en 58 aislamientos de B. abortus de Argentina. El empleo de este esquema de MLVA nos permitió discriminar entre las dos biovariedades de B. abortus analizadas yponer de manifiesto la gran diversidad de genotipos de esta especie circulantes en elpaís. Además, a través del análisis mediante goeBURST se pudo relacionar a todoslos genotipos entre sí y proponer al genotipo de la biovariedad 2, E1, como genotipofundador. Este hecho ya había sido propuesto por Margaret Meyer en los años 90basándose únicamente evidencias bioquímicas, en este trabajo se aportan, además,evidencias moleculares. Dada su localización expuesta, las lipoproteínas bacterianas cumplen una granvariedad de funciones, muchas de ellas asociadas a virulencia. En la actualidad, solotres lipoproteínas de B. abortus, Omp10, Omp16 y Omp19, se encuentran biencaracterizadas. Como primer objetivo de la segunda parte de la tesis, nos propusimosconocer cuántas lipoproteínas están codificadas por el genoma de B. abortus S2308 yqué roles cumplen en la bacteria. Se identificaron 58 lipoproteínas de B. abortusmediante herramientas bioinformáticas. Para determinar su rol en virulencia, segeneraron cepas mutantes mediante disrupción integrativa de los genes que codificanpara 24 de ellas y posteriormente, se evaluó si presentan fenotipo atenuado en elmodelo murino de infección esplénica. Una de las mutantes resultó atenuada (B.abortus Lp1, siendo BAB1_0009 el marco de lectura interrumpido) por lo que serealizaron diferentes estudios para caracterizarla. Posteriormente, se analizó lacapacidad de generar una respuesta inmune protectora de la cepa mutante atenuadaempleando el modelo de protección esplénica en ratones BALB/c. Los resultadosmostraron una capacidad protectiva superior a la generada por la cepa B. abortus S19,empleada como cepa vacunal en la actualidad en bovinos. Para determinar si la 3atenuación en virulencia de la mutante en B. abortus también se observa al interrumpirlos genes ortólogos de B. suis y B. melitensis, se construyeron las respectivas cepasmutantes, se evaluó su virulencia y se caracterizaron. Se confirmó el fenotipoatenuado sólo en la cepa mutante de B. suis. Esta parte de la tesis contribuyó adeterminar los posibles roles que cumplirían las lipoproteínas en B. abortus y aidentificar a una lipoproteína, OppA, codificada por BAB1_0009, que participaría envirulencia en B. abortus y B. suis y que, al menos la cepa mutante B. abortus Lp1,sería capaz de generar una respuesta inmune protectora en el modelo murino. Estosresultados sientan las bases para el diseño y evaluación de nuevas vacunas contra labrucelosis.