Rol de la fosforilación en la regulación funcional de la proteína de movimiento TGBp1 del potato virus X - Binaghi, María (2012)
El Potato virus X (PVX) es un virus de plantas perteneciente al género Potexvirus. Sugenoma está compuesto por una única molécula de ARN que codifica una replicasaviral, tres proteínas de movimiento (MPs: TGBp1, TGBp2 y TGBp3) y la proteína de lacápside (CP). La proteína TGBp1 es una proteína multifuncional requerida para elmovimiento viral célula a célula en la planta hospedera. Se ha demostrado que esta MP es fosforilada en los residuos T193 y T214 por una quinasa tipo CK2. Diferenteslíneas de investigación sugieren que la fosforilación de las proteínas virales puederegular la replicación y el movimiento viral. El objetivo de este trabajo fue estudiar elrol de la fosforilación en la regulación funcional de la proteína de movimiento TGBp1de PVX y en su interacción con la proteína de plantas remorina (REM). Para ello seconstruyeron por mutagénesis dirigida versiones de TGBp1 no fosforilables (T193A y T214A) y otras que simulan la fosforilación (T193D y T214D). En ensayos detranscomplementación de la movilización célula a célula de un virus defectivo paradicha función, se demostró que las modificaciones en ambas treoninas resultanperjudiciales en la complementación del movimiento viral. Se determinó que lafosforilación de TGBp1 en la T193 regula la estabilidad de esta proteína viral por mediode un mecanismo que involucra la presencia de una secuencia de degradación tipo PEST en el extremo C-terminal de dicha proteína. A través de la combinación deestudios que involucran el análisis comparativo in silico de varias TGBp1s de virus delos géneros Alpha y Betaflexiviridae y de estudios por mutagénesis dirigida, sedeterminó que la T193 y la secuencia PEST C-terminal se encuentran conservadas entodas las TGBp1s analizadas, sugiriendo que la fosforilación en la T193 de estas MPssería un mecanismo regulatorio de la estabilidad de dichas proteínas. Por otra parte, elanálisis funcional de las fosfomutantes T193 y T214 de TGBp1 determinó que lafosforilación en dichos residuos afecta negativamente la actividad supresora del PTGSde TGBp1. Los ensayos de interacción entre TGBp1 de PVX y la proteína REMdeterminaron que tanto el dominio N- como el C-terminal de TGBp1 son necesariospara la interacción y que la misma no es regulada por fosforilación en los residuos T193 y T214 de TGBp1. Por otro lado, este trabajo presenta las primeras evidenciasque la interacción entre distintas proteínas TGBp1s y REM se encontraría conservadaentre los virus que utilizan estrategias de movilización del tipo Triple Bloque de Genes (TGB). Los análisis realizados para determinar el efecto biológico de REM sobre la TGBp1 de PVX demostraron que la proteína REM no interfiere en la actividad del PTGSde esta proteína viral. Finalmente estudios de localización subcelular determinaronque la localización subcelular de TGBp1 es influenciada por la presencia de las otrasproteínas virales y que a su vez varía según si la proteína se encuentra fusionada en suextremo N- o C- terminal a GFP.