Biosíntesis del manano de pared celular de levadura - Behrens, Nicolás H. (1967)
En esta tesis se estudia la biosíntesis del munano,uno de los principalescomponentes de la pared celular de la levadura. Se desarrolla una técnica de obtención de la enzima a partir de ladescripta por Algranati, Carminatti y Cabib (1). La enzima se prepara reproduciblementeen forma particulada. Este resultado es coherente con elhecho que debe sintetizar un componente estructural de la célula como esel manano en la pared celular. Dos métodos rápidos de dosaje que se desarrollan, permiten acelerar laobtención de los resultados. Empleando GDP-manosa14C en la manosa, en elprimero se separa el exceso de CDP-manosa14C del manano 14C formado sometiendola mezcla de reacción a una electroforesis, mientras que en el segundo se separan por precipitación del manano con etanol 66%. Mediante gradientes de sacarosa se intenta fraccionar e identificar ala partícula subcelular a la cual se encuentra unida la enzima. Se estudiaron varias propiedades de la enzima. Se determinó que requiere específicamente Mn++ para su actividad. No se pudo detectar un requerimientode aceptor, de manera que la enzima tendría un aceptor endógeno asociado. Se estudió la estructura del producto, comparandola con la estructuradel manano natural. Se determina que posee las mismas uniones químicasy que la enzima une por lo menos tres manosas en forma consecutiva. Con estos resultados se demuestra que lo que se sintetiza es efectivamente manano. Como el manano posee tres tipos de uniones químicas en su estructuraa1->6 al->2 y a1->3, es posible que exista más de una enzima responsable de su síntesis. Se determinó que en la reacción la guanosina aparentemente se libera comouna mezcla de GDP y GMP. Este resultado podría ser explicado por 1a acción de dos enzimas distintas. Se estudia algunas propiedades de 1a unión que mantiene al manano formadopor la enzima unido a una partícula subcelular sedimentable, a diferenciadel manano purificado, que es perfectamente soluble. Se determinóque la unión es muy sensible a cambios del pH y es posible destruirla por acciónde enzimas específicas. El conocimiento del mecanismo de la biosíntesie del manano,junto conlos estudios que deberán efectuarse sobre la formación de los demás componentesde la pared celular, podrá servir para llegar finalmente a sintetizaruna pared celular in vitro.