Síntesis y evaluación de sustratos e inhibidores de trans-sialidasa de Trypanosoma cruzi, agente del mal de Chagas - Giorgi, María Eugenia (2012)
La trans-sialidasa de Trypanosoma cruzi (TcTS) cataliza la transferencia deácido siálico desde los glicoconjugados del hospedero a β-galactopiranósidosterminales en las mucinas del parásito. Esta enzima no tiene equivalentes enmamífero y durante la infección se secreta activamente induciendo alteracioneshematológicas. Se había demostrado que en cepas menos infectivas las cadenas Oglicosídicasde las mucinas contenían β-galactofuranosa además del aceptor β-galactopiranosa. El propósito de esta tesis es contribuir al conocimiento de la acción de la TcTSsobre sustratos aceptores o donores de ácido siálico y la síntesis y evaluación deinhibidores de la enzima. Se estudiaron las propiedades aceptoras de los oligosacáridos sintéticos queson componentes de las mucinas para correlacionar su estructura con la habilidad deactuar como sustratos. Se calcularon los valores de Km para los azúcares libres, losoligosacáridos alditoles y los bencil glicósidos. Todos los compuestos resultaronbuenos aceptores de ácido siálico, o sea que la galactofuranosa no afectaría lasialilación de las unidades de Galp presentes en los mismos oligosacáridos. Se llevó acabo la sialilación preparativa del bencil glicósido del hexasacárido β-D-Galp-(1→2)-[β-D-Galp-(1→3)]-β-D-Galp-(1→6)-[β-D-Galf(1→2)-β-D-Galf(1→4)]-D-GlcNAc utilizandouna enzima recombinante y sialillactosa como donor. El aislamiento del productosialilado permitió determinar por espectros RMN mono y bidimensionales que el ácidosiálico se incorpora selectivamente a la Galp terminal unida (β1→3). Con respecto a sustratos donores en la reacción de TcTS se determinó sucapacidad de transferir N-glicolilneuramínico (Neu5Gc) desde oligosacáridos sintéticosa lactosa y análogos con igual o mejor eficiencia que el ácido siálico común (Neu5Ac). Por otra parte, con el fin de aumentar la vida media en la circulación sanguíneade inhibidores de la reacción de trans-sialilación, se sintetizaron conjugados conpolietilenglicol (PEG), en particular derivados con PEG de 8-brazos de análogos delactosa. La multivalencia se confirmó por RMN y se evaluó la biodisponibilidad de losconjugados en plasma de ratones. Se encontró que la misma mejoróconsiderablemente con respecto a conjugados lineales que también fueronsintetizados en este trabajo de tesis. Palabras clave: