La proteína no-estructural NS1 exclusiva del virus respiratorio sincicial : mecanismo de plegamiento y ensamblado quasi-espontáneo de oligómeros esféricos estables - Pretel, Miguel Esteban (2014)
Los Paramixovirus son una familia diversa de virus ARN de cadena negativa pertenecientes alorden de los Mononegavirales. Estos virus han evolucionado diversas estrategias para bloquearlos mecanismos de respuesta inmune innata del huésped en el curso de un proceso infeccioso. Elvirus respiratorio sincicial (RSV) es la mayor causa de enfermedad pediátrica en el mundo. Estevirus, contiene a dos proteínas no estructurales (NS1/NS2) la cuáles sólo se encuentran en RSVy no muestran homología con ninguna otra proteína. NS1 y NS2 han sido postuladas como losprincipales factores de virulencia de RSV, interviniendo en el bloqueo de la respuesta inmuneinducida por el virus. Se han identificado múltiple blancos celulares que interactúan con NS1 y NS2, principalmente relacionados a las vías de inducción y respuesta a interferón. En estetrabajo de tesis, se realizó el estudio de la conformación de NS1 en solución, haciendo uso demétodos bioquímicos y biofísicos para su estudio. Como primera medida, se desarrolló unprotocolo de expresión y purificación que permitió obtener un rendimiento de 10 mg/L deproteína homogénea en solución. Se determinó que NS1 es un monómero plegado globular, elcual contiene regiones flexibles que presentan intercambio conformacional. La temperaturainduce cambios estructurales que llevan a la formación de oligómeros esféricos solubles (NS1SOs) los cuales presentan propiedades amiloides. Se analizó la cinética de formación deestos oligómeros, a partir de lo cual se propone un modelo de ensamblado identificando eventosclave para el proceso. Por otro lado, estudios de plegamiento al equilibrio indican que NS1 sedespliega cooperativamente en un proceso reversible de dos estados (Nativo – Desplegado),mientras que NS1SOs primero se disocia a monómeros nativos y luego se despliega. Estudios decinética de plegado de NS1, indican que mientras que el desplegado de la proteína esrelativamente sencillo, su plegado es complejo y limitado cinéticamente por la presencia demúltiples intermediarios, compatible con heterogeneidad cis/trans de prolinas en el estadodesplegado. En resumen, en el presente trabajo se describe la diversidad conformacional de laproteína NS1. Esta proteína se encuentra en cuasi-equilibrio con oligómeros esféricos y estables,los cuales se forman en condiciones compatibles con un entorno celular. Estos estudiosconstituyen los primeros en analizar los equilibrios conformacionales para esta proteína ypodrían explicar sus múltiples blancos y funciones reportadas.