Caracterización funcional de la proteína epididimaria DE (CRISP-1) a través de modelos in vitro y generación de animales "knock out" - Da Ros, Vanina G. (2007)
La proteína epididimaria de rata DE es el primer miembro descripto de la familia de proteínas ricas en cisteínas (CRISP) y, por ende, también conocida como CRISP-1. DE se asocia a la región dorsal de la cabeza del espermatozoide durante la maduración epididimaria, migra al segmento ecuatorial bajo condiciones capacitantes, y participa en el proceso de fusión de gametas a través de sitios complementarios presentes en la superficie del ovocito. El primer objetivo de este trabajo fue estudiar la influencia del bicarbonato, ión indispensable para la capacitación, sobre la migración de la proteína DE. En paralelo, se evaluó el efecto sobre otros dos parámetros espermáticos asociados a la capacitación, tales como la fosforilación de proteínas en tirosina y la expresión de la capacidad fusogénica. Los resultados indicaron que si bien los tres parámetros evaluados fueron bicarbonatodependientes, la migración de DE al segmento ecuatorial ocurriría a través de vías alternativas a la clásica cAMP/PKA, involucrada en la fosforilación en tirosina y la capacidad fusogénica del espermatozoide. El segundo objetivo de este trabajo consistió en estudiar los mecanismos moleculares por los cuales DE interactúa con sus sitios en el ovocito. El empleo de fragmentos recombinantes y péptidos sintéticos indicó que el sitio activo de DE residiría en una región de sólo 12 aminoácidos altamente conservada en todos los miembros de la familia CRISP. Finalmente, la relevancia de DE/CRISP-1 para la fertilidad fue estudiada a través de la generación de ratones “knock out” para dicha proteína. El análisis del fenotipo de los mismos indicó que si bien la fertilidad de los animales no se vio afectada, los espermatozoides presentaban una capacidad fusogéncia significativamente disminuida, sugiriendo que otras proteínas con características y/o función similares estarían compensando el efecto observado. En conjunto, estos resultados proveen importante información sobre los mecanismos moleculares involucrados en la interacción de gametas y apoyan la existencia de mecanismos compensatorios con el fin de asegurar el éxito de la fertilización.