Quinasa de proteínas dependiente de Calcio de Solanum tuberosum, L. y su relación con la tuberización - Mac Intosh, Gustavo Carlos (1997)
Se purificó a homogeneidad una quinasa de proteínas dependiente de calcio (CDPK) de fracciones solubles de plantas de papa, (Solanumtuberosum L.). La CDPK de papa es estrictamente dependiente de calcio (K0,5= 0,6 μM) y fosforila una amplia variedad de sustratos, entre loscuales el syntide 2 es el mejor aceptor de fosfatos (Km = 33 μM). La quinasa es inhibida por quelantes de calcio, derivados de fenotiazina y W7 (IC50= 0,25 mM). Anticuerpos policlonales dirigidos contra el dominio regulatorio de la CDPK de soja reconocen un polipéptido de 53 kDa en las fracciones purificadas de papa. En ensayos de auto fosforilación la misma banda aparece fuertemente marcada con [γ³²P]ATP en presencia de calcio. La actividad de CDPK es alta en plantas no inducidas a tuberizar, pero aumenta 2.5 veces en el comienzo del desarrollo del tubérculo y disminuyea la mitad de la actividad de las plantas no inducidas cuando el tubérculo está completamente formado. Se observó fosforilación dependiente decalcio de sustratos endógenos específicos de los estadios tempranos de formación del tubérculo (bandas de 68, 51 y 46 kDa). Estos polipéptidos no aparecieron en plantas no inducidas ni el tubérculos maduros, indicando que éste es un evento específico de los primeros estadios. Además se detectó la defosforilación de un polipéptido específico en lasplantas inducidas, lo que sugiere la existencia de fosfatasas. Lapreincubación de los extractos crudos de estas plantas con inhibidores de fosfatasas produjo un aumento del 100% en la actividad de CDPK. El ácido jasmónico, propuesto como inductor de tuberización no indujo este proceso cuando se agregó a los medios de cultivo de plantas cultivadas in vitro. Produjo un aumento del crecimiento de plantas enbajas concentraciones y una inhibición del crecimiento al tratar lasplantas con altas concentraciones. Además produjo una disminución en la actividad de CDPK de las plantas tratadas en forma dependiente de la concentración. La sacarosa es esencial para la tuberización. Plantas tratadas con altas concentraciones (8 %) de este azúcar presentaron un importante aumento en la actividad de CDPK y en la actividad de fosfatasas de proteínas capaces de defosforilarsustratos de la quinasa. Nuestros resultados sugieren que la CDPK y fosfatasas asociadas participan en el control de los primeros estadios de tuberización y que la sacarosa probablemente interviene en esta regulación modulando la actividad de estas enzimas. El ácido jasmónico no tendría participación en los eventos tempranos de la formación del tubérculo.