Clonado y expresión de ubicuitina en Neurospora crassa - Taccioli, Guillermo (1989)
La ubicuitina es una proteína de 76 residuos aminoacídicosaltamente conservada en la escala evolutiva, que se encuentra entodos los organismos eucarióticos, libre o conjugada covalentementea proteínas. La función fisiológica de ubicuitina está relacionada conel camino de degradación proteica dependiente de ATP por vía nolisosomal, con la regulación del ciclo celular y con la respuestaa diferentes condiciones de estrés. A pesar de que la ubicuitina está codificada por una familiamultigenética, ninguno de ellos lo hace para la proteína madura,sino para un precursor en el que la ubicuitina se encuentrafusionada por su extremo C-terminal a si misma (arreglo en tándemcabeza-cola en poliubicuitina), o bien, a una secuencia aminoacídicano relacionada con motivos de unión a ácidos nucleicos. En Neurospora crassa, la inhibición parcial de la sintesisproteica por tratamiento con cicloheximida, pero no con puromicina,conducen a un aumento de la población de transcriptos de poliubicuitina. Otras situaciones de estrés como ayuno, crecimiento en presenciade análogos de aminoácidos, estrés térmico, tratamientocon arsenito de sodio, que son inductores en otros organismos dela transcripción de este gen, no tienen efecto en Neurospora crassa. En nuestro laboratorio se aislaron y caracterizaron dos genesde ubicuitina de Neurospora crassa que corresponden, i) algen de poliubicuitina y ii) a un gen de fusión. Estos genes clonados reconocen especies de ARN de 1,3 y 0,7 Kb, respectivamente en Northern blots. Los análisis de Southern blots parecerían indicar la existenciade un locus único para el gen de poliubicuitina que contiene 4 repeticiones en tándem cabeza-cola con un aminoácido extrafusionado al C-terminal del último monómero. El gen de fusión de Neurospora crassa corresponde a unaunidad que codifica para ubicuitina ligada a una extensión de 78aminoácidos, y su expresión se encuentra particularmente aumentadaen conidias germinadas y en fase logarítmica. Las extensiones de fusión de ubicuitina pertenecen a unafamilia de proteínas ribosomales que además, están involucradasen el procesamiento del rARN de ambas subunidades. En condiciones de mayor replicación celular, los mensajeroscorrespondientes a estos genes de fusión se expresan activamente,como se encontró en Neurospora crassa. Se comprobó que el transcripto de 0,7 Kb no sufre variaciónen respuesta a los estrés estudiados, y que su expresión se reducepor ayuno. La comparación de la secuencia aminoacídica codificada porestos genes con la encontrada en otros organismos, contribuye aconfirmar la alta conservación evolutiva de esta proteína. Sinembargo, el comportamiento particular de la respuesta al estrésen este organismo, plantea algunos nuevos interrogantes respectoa la regulación de la expresión del gen de poliubicuitina.