Caracterización de las células B productoras de IL-10 de sangre periférica en pacientes con enfermedad de Chagas crónica - Girard, Magalí Celeste (2021)
El curso clínico de la enfermedad de Chagas crónica (EChC) depende tanto de la respuesta inmune generada por el huésped como de la capacidad de Trypanosoma cruzi (T. cruzi) para evadirla. El desarrollo de una potente respuesta inflamatoria es nece sario para la eliminación del parásito, pero a su vez contribuye al daño tisular. Así, los mecanismos reguladores de la inmunidad constituyen elementos claves para contener esta respuesta exacerbada y su estudio es fundamental para entender los factores involucrados en la inmunopatología. La función regulatoria de las células B (Bregs), a través de la secreción de citoquinas anti-inflamatorias, principalmente IL-10 (B10), ha sido de interés en el estudio de enfermedades infecciosas y autoinmunes en humano, siendo las poblaciones CD24highCD38high (transicionales) y CD24highCD27+ (memoria), las más enriquecidas en IL-10 en san gre periférica. En el contexto de la EChC, se sabe que T. cruzi modifica la distribución fenotípica de las células B de sangre perifé rica, sin embargo, la población de células B10 continúa siendo poco estudiada. En la presente Tesis se evaluó la frecuencia y la distribución fenotípica, en base a los marcadores CD24, CD27 y CD38, de las células B y en particular de las células B10 de sangre periférica en pacientes con distintas formas clínicas de la EChC, en condiciones ex vivo y frente al estímulo in vitro. Asimismo, se estudió la expresión de la molécula regulatoria PD-L1 en las células B estimuladas in vitro. Para ello, las células mononucleares de sangre periférica (CMN) de pacientes con EChC (con o sin cardiopatía) e individuos no infectados (NI-contro les) se incubaron con PMA+Ionomicina junto con Brefeldina A (PIB) durante 5 hs (condición ex vivo) ó las células B aisladas se estimularon con lisado de T. cruzi, CpG+CD40L o CpG+CD40L+T. cruzi durante 48 hs y las últimas 5 hs junto con PIB, y se marca ron para su análisis por citometría de flujo. Los resultados ex vivo mostraron que los pacientes con cardiopatía presentaron una expansión de las células B transicionales, así como una distribución fenotípica diferencial de las células B10, en particular un incremento de las células B10 vírgenes y B10 CD24-CD27-. La frecuencia de células B10 totales y la expresión de IL-10 en las mismas fueron similares entre los grupos, evidenciando que estas células en los pacientes infectados con T. cruzi mantienen la capacidad para producir IL-10. Adicionalmente, la distribución fenotípica de las células B10 ex vivo fue similar en pacientes sin alteraciones cardíacas e individuos NI. In vitro, el estímulo con T. cruzi indujo una disminución de las células B transicionales en los pacientes con EChC, así como un aumento de las células B10 y de la secreción de IL-10 en todos los grupos, siendo menos pronunciado en los pacientes con compromiso cardíaco. La distribución fenotípica de las células B10 mostró una disminución de las B10 transicionales en los pacientes sin cardiopatía y un aumento de las B10 CD24-CD27- y CD27-CD38+ en los pacientes con la forma cardíaca. Estos resultados sugieren que la estimulación con T. cruzi induce un aumento de tipo innato de células B10, que en los pacientes con cardiopatía estaría asociado con el incremento de poblaciones B10 CD27-, mientras que en los pacientes sin alteraciones y en los NI, estaría dado por poblaciones fenotípicas diferentes a las analizadas en este trabajo. A su vez, las células B de los pacientes con cardiopatía evidenciaron una menor diferenciación a células B10 frente al estímulo con CpG+CD40L. Por otra parte, los pacientes con EChC mostraron un aumento de células B PD-L1+ frente al estímulo con T. cruzi y una menor expre sión de esta molécula regulatoria en las células estimuladas de forma inespecífica. Estos hallazgos muestran una relación entre las alteraciones fenotípicas en las células B10 y las distintas formas clínicas de la EChC, sugiriendo la potencial contribución de estas células en el curso clínico de la infección crónica con T. cruzi.