Detección del gen del receptor de andrógenos en tejidos normales y tumorales, por métodos moleculares convencionales y de microarrays

• Autores: Maurizzio, Sergio Alejandro
• Año de publicación: 2005
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis de maestría
• Colaborador/a o director/a de tesis: Mordoh, José
• Materia: ONCOGENES; MARCADORES MOLECULARES
• Institución: Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

La división celular en tejidos reproductivos masculinos como la próstata, es controlada por la interacción entre testosterona y dihidrosterona, con el receptor de andrógenos. Seguidamente ala union receptor- Iigando, se produce la translocación de este complejo, al núcleo celular. Se ha observado que el hAR, como factor de transcripción , regula la expresión de genes necesarios para el desarrollo normal de tejidos sexuales y media la acción de los andrógenos tanto en células específicas normales, como tumorales. Es por esto que, como parte de la terapeutica medica actual, se intenta modular su actividad. Hasta la fecha se han reportado mas de 600 mutaciones dentro de las regiones codificantes del gen, asociadas a diversas patologías tanto en el hombre como en Ia mujer. Por otro lado, este laboratorio en trabajos anteriores, ha detectado al receptor de andrógenos por técnicas de inmunocitoquímica, en células de línea tumoral de melanoma humano (llB- MelJ). El objetivo que se plantea en este trabajo, es la detección del RNAmensajero del gen hARpor métodos moleculares clásicos así como la revisión bibliográfica de los métodos de detección por la técnica de mícroarrays. Se crearon un par de primers especificos utilizando un programa informatico, para la detección del mensajero a partir de células tumorales IlB-Mel-Jy tejido hiperplásico de próstata como control positivo. La especificidad de dichas secuencias, se puso a prueba utilizandolas bases de datos japonesa NPJ, y BLAST N del NCBI. En un primer intento de amplificacion, se logro detectar una banda del tamanio esperado, aunque con baja produccion. Para mejorarla, se intento corregir los parametros de las amplificaciones asi como mejorar la extraccion y manipulacion de RNAde las celulas y biopsas. A pesar de ello, no fue posible concretar la deteccion del receptor de androgenos en celu/as llB-MelJ. El escaso material genetico que brindaron las biopsias de hiperplasia de prostata, tampoco permitieron verificarcomo correctos, aljuego de primers diseniado. De todas formas, este trabajo, ha permitido al autor adquirir experiencia práctica en técnicas de biología molecular, en el diseño de primers y en la ejecución de PCR, asi como haber realizado una búsqueda exhaustiva de los diferentes diseños y técnicas de microarrays, para ser aplicadas en el futuro. Ha sido posible concluir que las condiciones del material que vaya a ser utilizado para Ia interrogación de muestras (sondas), por medio de técnicas clásicas de detección molecular y en especial de microarrays, deben ser excepcionales cualicuantitativamente.
Fil: Maurizzio, Sergio Alejandro. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.