Estudio de aislamientos nacionales y desarrollo de una vacuna a subunidad, direccionada a células presentadoras de antígenos, para el Virus de la Lengua Azul - Legisa, Danilo Mario (2014)
La Lengua Azul es una enfermedad que afecta principalmente rumiantes salvajes ydoméstico, y representa una importante barrera para el comercio internacional de animales y sussubproductos. El Virus de la Lengua Azul es el causante etiológico de la enfermedad y estransmitido por insectos hematófagos del género Culicoides. El Virus de la Lengua Azul , es elmiembro prototipo del género Orbivirus dentro de la familia Reoviridae. El virión está compuestopor una doble capa proteica desnuda que envuelve un genoma de 10 segmentos lineales de ARNdc, los cuales codifican para al menos diez proteínas, 7 proteínas estructurales y al menos 4 noestructurales. La distribución del Virus de la Lengua Azul es global aunque en ciertas zonas la informaciónes escasa. En Sudamérica, evidencia serológica de la presencia del virus fue encontrada todos lospaíses menos Uruguay y Bolivia. Argentina y Brasil son los únicos países donde ha sido aislado elvirus. En Argentina han sido obtenidos 5 aislamientos de Virus de la Lengua Azul serotipo4 enganado bovino. Tres de estos aislamientos fueron logrados entre los años 1999-2001, mientras losdos restantes fueron obtenidos en los años 2009 y 2010 como parte del presente trabajo de tesis. La medida de control más práctica y eficaz es la inmunización profiláctica de los animalessusceptibles. Desde principios del siglo XX se han desarrollado vacunas atenuadas e inactivadaseficientes para la Lengua Azul. Sin embargo, las desventajas en cuanto a bioseguridad y efectosadversos impulsan el desarrollo de vacunas a subunidad, no infecciosas como alternativa a lasvacunas convencionales. En este trabajo de tesis se abordó un análisis epidemiológico molecularde los aislamientos argentinos del VLA y el desarrollo de una vacuna a subunidad direccionada acélulas presentadoras de antígeno. El análisis epidemiológico molecular se basó en la obtención y análisis de las secuencias de 5 de los 10 segmentos virales (Segmentos 2, 3, 6, 7 y 10). El análisis de los segmentos 2 y 6 resultóen un cluster de secuencias argentinas dentro del clado del serotipo 4 y también dentro del grupodel nucleotipo A (definido para cada segmento). El análisis de los segmentos 3, 7 y 10 mostró quelos aislamientos argentinos agrupan dentro del cluster de aislamientos de topotipo occidental owestern, indicando que su origen se remontaría a África/Europa. El análisis filogenético reveló que,además de este origen, las secuencias argentinas representaron un fuerte linaje Sudamericano de evolución independiente. El desarrollo de la vacuna a subunidad se basó en la expresión de la proteína VP2, mayoritaria de la cápside externa e inmunodominante, sola o fusionada a la molécula APCH (Antigen Presenting Cell Homing) capaz de dirigir moléculas a células presentadoras de antígeno,utilizando el sistema de expresión de baculovirus. Los ensayos de inmunogenicidad en cobayos y bovinos utilizando estos dos antígenos, resultaron en altos títulos de anticuerpos neutralizantessimilares a los evocados por la vacuna formulada con virus inactivado. Más aún, se obtuvieron títulos comparables para VP2 y dosis 4 veces menores de APCH-VP2 demostrando la capacidad APCH de potenciar la generación de anticuerpos. Como caracterización de la respuesta inmuneasociada se analizó el perfil de inmunoglobulinas G y la presencia de células T de memoria. El perfilde IgG en los bovinos inmunizados con APCH-VP2 mostró una mayor proporción de IgG1 encomparación con los grupos vacunados con VP2 sola o con el virus inactivado. Por otro lado, lainmunización con las vacunas experimentales, mostró generación de células T de memoria para VP2 sola. Además, se comprobó la capacidad de las vacunas recombinantes de diferenciasanimales vacunados de infectados. Esta sección constituye un aporte en el desarrollo de vacunas asubunidad, capaces de generar una respuesta inmune comparable a vacunas inactivadas pero concaracterísticas emergentes.