Esferoides multicelulares como modelo tumoral in vitro para el estudio de la expresión de transgenes y la terapia génica - Casais, Cecilia Carolina (2006)
El cultivo celular tridimensional en esferoides es un modelo mucho más realista que el cultivo en monocapas para estudiar el comportamiento de los tumores y su respuesta a distintas terapias. Los esferoides expresaron transgenes lipofectados en forma transitoria y dirigidos por el promotor CMVie (promotor inmediato-temprano del Cito Megalo Virus)(plásmido pCMVβ) con mayor eficiencia que las monocapas, y dicha expresión persistió durante más de 75 días, siendo en dicho momento similar a la de monocapas no repicadas de 8 días. Este aumento en la expresión se revirtió cuando las células formaron monocapas, y no fue debido a la integración de los vectores, que persistieron como episomas. El agregado de las secuencias EBNA-1 y oriP del virus Epstein-Barr al pCMVβ aumentó la expresión del transgén en células humanas HEp-2. El promotor CMVie produjo los mayores niveles de expresión en todas las líneas celulares evaluadas. Su deleción parcial (325 bp del extremo 5´) prácticamente anuló su actividad, la que fue parcialmente restaurada por el agregado de cortas secuencias consenso. Los esferoides resultaron menos sensibles al sistema gen suicida/prodroga HSVtk/GCV que las monocapas correspondientes, y presentaron un menor efecto bystander. Este fenómeno no fue consecuencia de una baja penetración del GCV sino que involucró otros mecanismos. Sin embargo, los esferoides transfectados con HSVtk fueron significativamente más sensibles al GCV que sus controles transfectados con βgal, lo que sustenta el uso de esta estrategia in vivo.