Caracterización de la proteína de 24 kDa de PVX, y obtención de plantas transgénicas resistentes a tobamovirus

• Autores: Ares, Vera Ximena
• Año de publicación: 1997
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Mentaberry, Alejandro N.
• Materia: MOVEMENT PROTEIN; TRIPLE GENE BLOCK; PLANT VIRUS; PVX; TMV
• Institución: Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

La proteína de 24 kDa (p24) del potato virus X (PVX) es una de las tres proteínas responsables del transporte de este virus en plantas infectadas. En este trabajo de Tesis se obtuvieron anticuerpos específicos contra p24, con los cuales se pudo detectar y caracterizar su expresión en protoplastos y en tejido de plantas de tabaco infectadas. También, se obtuvieron plantas transgénicas que expresan p24 y que pueden complementar el transporte de un mutante de PVX defectivo en este gen. Las plantas transgénicas que producen altos niveles de p24 presentan un fenotipo alterado, que consiste en plantas enanas y cloróticas. Estas plantas mostraron resistencia a la infección con los tobamovirus tobacco mosaic virus (TMV)y tomate virus Ob (ToMV-Ob). Sin embargo, cuando se las infectó con PVX o con el potato virus Y (PVY), no mostraron diferencias en los niveles de virus con respecto a las plantas no transformadas, aunque los síntomas de infección con PVX fueron más severos. Recíprocamente, las plantas transgénicas que expresan la proteína de movimiento (MP) de TMV mostraron resistencia a PVX cuando se inocularon con este virus. Por último, se realizaron estudios de complementación entre mutantes de TMV y de PVX defectivos en transporte, con las plantas transgénicas que expresan p24 y la MP de TMV, para estudiar el grado de interacción entre los sistemas de transporte de ambos virus.
The p24 protein, one of the three proteins implicated in local movement of potato virus X (PVX) was expressed in transgenic tobacco plants (Nicotianatabacum, Xanthi D8 NN). Plants with the highest level of p24 accumulation exhibited a stunted and slightly chlorotic phenotype. These transgenic plants facilitate the cell-to-cell movement of a mutant of PVX that contained a frameshift mutation in p24, indicating that the transgenic protein provides movement function and is able to act in trans. Upon inoculation with tobacco mosaic virus (TMV), thesize of necrotic local lesions was significantly smaller in p24 plants than in nontransgenic control plants. Resistance to tobamoviruses was also evidenced after inoculation of p24 plants with Ob, a virus that evades the hypersensitive response provided by the N gene. In the later case no systemic symptoms were observed and virus accumulation remained low or undetectable by Western immunoblotanalysis and back-inoculation assays. In contrast, no differences were observed invirus accumulation after inoculation with PVX, although more severe symptoms were evident on p24 expressing plants compared with control plants. Similarly, infection assays conducted with potato virus Y (PVY) showed no differences between control and transgenic plants. On the other hand, a considerable delay in virus accumulation and symptom development was observed when transgenic tobacco plants containing the MP of TMV were inoculated with PVX. Finally, movement detective mutant of TMV was inoculated on p24 plants or in mixed infections with PVX on non-transgenic plants. Both types of assays failed to produce TMV infections, implying that TMV MP is not interchangeable with the PVX movement proteins.
Fil: Ares, Vera Ximena. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.