Variabilidad genética y expresión del antígeno B de Echinococcus granulosus y sus implicancias en el diagnóstico de la hidatidosis

• Autores: Kamenetzky, Laura
• Año de publicación: 2007
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Rosenzvit, Mara C.
• Materia: ANTIGENO B; VARIABILIDAD GENETICA; ECHINOCOCCUS GRANULOSUS; HIDATIDOSIS; INMUNOLOCALIZACION; ANTIGEN B; GENETIC VARIABILITY; ECHINOCOCCUS GRANULOSUS; HYDATID DISEASE; IMMUNOLOCALIZATION
• Institución: Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

Echinococcus granulosus, el agente causal de la hidatidosis quística, existe como un número de genotipos (G1-G10) que difieren en características biológicas de importancia como la especificidad del hospedador intermediario y la infectividad en humanos. En la Argentina se han identificado cinco genotipos (G1, G2, G5, G6 y G7), cuatro de ellos capaces de infectar al hombre. Estos genotipos se agrupan filogenéticamente en tres clusters G1/G2, G5 y G6/G7. Uno de los principales antígenos presentes en el líquido del quiste hidatídico, el antígeno B (AgB) es una lipoproteína oligomérica codificada por una familia de al menos cinco genes (AgB1- AgB5). El AgB nativo fue ampliamente utilizado en el diagnóstico de la hidatidosis y probablemente esté involucrado en la evasión de la respuesta inmune. Sin embargo la función y localización de esta proteína en el parásito no ha sido descripta con certeza. En esta tesis se muestra que el AgB es extremadamente polimórfico en E.granulosus. Cada cluster de genotipos posee diferente tipo y número de secuencias correspondientes al AgB, algunas de ellas bajo presión de selección. El análisis exhaustivo de estas secuencias permitió desarrollar métodos sensibles y específicos para determinar la presencia de transcriptos de AgB en los clusters de genotipos y en los estadíos del ciclo de vida del parásito. El genotipo G1 expresa los cinco genes, sin embargo en el genotipo G7 se encontraron sólo transcriptos funcionales de AgB1, AgB3 y AgB4. Las secuencias relacionadas al AgB2 presentes en el genotipo G7 corresponderían a pseudogenes. Se describió por primera vez la presencia del AgB en oncosferas y adultos, siendo el AgB3 y AgB5 los más expresados. Asimismo, se obtuvieron proteínas recombinantes a partir de algunas de las variantes de AgB descriptas y se generaron anticuerpos monoclonales subunidad específicos. El análisis en conjunto de hibridación in situ e inmunohistoquímica del estadío protoescólex mostraron una localización del AgB2 y AgB4 en tegumento, ventosas, almohadilla rostelar y corpúsculos calcáreos mientras que la localización del AgB1 se determinó sólo en corpúsculos calcáreos. Las diferentes localizaciones de cada subunidad de AgB podrían indicar un rol diferencial de estas proteínas en el establecimiento y/o supervivencia del parásito. Por último se describe el estudio del potencial de dos de las subunidades de AgB para el inmunodiagnóstico de la hidatidosis en el marco de la Red Sudamericana de Serología Hidatídica.
Echinococcus granulosus, the causative agent of cystic hydatid disease, exists as a number of genotypes (G1-G10) which differ in biological characteristics such us intermediate host specificity and human infectivity. Five genotypes, four of them capable of infecting humans, have been identified in Argentina. These genotypes are grouped by phylogenetic analysis in three clusters, G1/G2, G5 and G6/G7. One of the main antigens present in hydatid cyst fluid is the oligomeric lipoprotein antigen B (AgB), which is encoded by a family of at least five genes (AgB1-AgB5). The native AgB has been currently used in immunodiagnosis of cystic hydatid disease and is probably involved in the evasion of the host immune response. However, the function and localization of this protein in the parasite have not yet been precisely described. It is shown, in this PhD thesis, that AgB is highly polymorphic in E. granulosus. Each genotype cluster has different type and number of AgB sequences, some of them being under natural selection pressure. The detailed analysis of these sequences derived in the development of more sensitive and specific methods for detecting the presence of AgB in the genotype clusters and in the different stages of parasite’s life cycle. The five AgB genes are expressed in G1 genotype, while only AgB1, AgB3 and AgB4 were found in G7 genotype as functional transcripts. AgB2 related sequences indetified in G7 genotype may probably represent pseudogenes. The expression of AgB in oncospheres and adult worms has been described for the first time, AgB3 and AgB5 genes are probably the most expressed in these stages. Recombinant proteins have also been obtained from some of the described AgB variants and monoclonal antibodies have been developed. In situ hybridization and immunohistochemical analysis of protoscoleces have shown that AgB2 and AgB4 localizes on the tegument, suckers, rostellar pad and calcareous corpuscles, while AgB1 localizes only on calcareous corpuscles. Differential localization of each subunit could mean that these proteins have different roles in growth and/or survival of the parasite. Finally, two AgB subunits have been analyzed for their potential in immunodiagnosis of human hydatid disease in a collaborative work with the South American Hydatid Serology Network.
Fil: Kamenetzky, Laura. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.