Identificación de epitopes B conservados en antígenos de superficie del hemoparásito Babesia bovis para el desarrollo de nuevas medidas de control para la babesiosis bovina

• Autores: Domínguez, Mariana
• Año de publicación: 2008
• Idioma: español castellano
• Tipo de recurso: tesis doctoral
• Colaborador/a o director/a de tesis: Jacobsen de Florín-Christensen, Mónica O.
• Materia: BABESIA BOVIS; EPITOPES B; VACUNA MULTIEPITOPICA; CANDIDATOS VACUNALES Y DIAGNOSTICOS; ELISA INDIRECTO; ELISA COMPETITIVO; BABESIA BOVIS; B-CELL EPITOPES; MULTIEPITOPIC VACCINE; VACCINE AND DIAGNOSTIC CANDIDATES; INDIRECT ELISA; COMPETITIVE ELISA
• Institución: Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

Babesia bovis es un protozoo intraeritrocítico transmitido a los bovinos por la garrapata Rhipicephalus microplus y causante de importantes pérdidas económicas en vastas regiones cálidas del mundo. Esta Tesis se enfocó en el estudio de la familia de proteínas MSA-2 (Merozoite Surface Antigen-2) de B. bovis para evaluar su utilidad como candidatos vacunales y diagnósticos. En primer lugar, se encontró que un miembro de esta familia, MSA-2c, contiene epitopes B expuestos superficialmente que están conservados entre dos cepas argentinas; y asimismo epitopes B sensibles a la neutralización. Para ampliar estas observaciones, se obtuvieron secuencias predichas de aminoácidos de MSA-2c y otros dos miembros de esta familia (MSA-2a1 y -2b) de varios aislamientos de B. bovis de Argentina, México y USA. Se identificaron in silico epitopes B en zonas altamente conservadas. Se obtuvieron péptidos sintéticos de cuatro de ellos, y se produjeron antisueros murinos. Los sueros reaccionaron con la superficie de merozoitos de una cepa argentina y una mexicana, indicando que estos epitopes B predichos son realmente expresados en ambos parásitos. Dos de estos epitopes B resultaron además sensibles a la neutralización y constituyen por tanto atractivos candidatos para una vacuna multiepitópica. Por otra parte, se observó la presencia de anticuerpos anti-MSA-2c en abundantes muestras de suero de bovinos infectados experimental y naturalmente con B.bovis. Por ello, se exploró su utilidad como antígeo de diagnóstico. Se desarrolló un ELISA indirecto, que fue efectivo para infecciones experimentales pero solo parcialmente eficiente para infecciones de campo. Para mejorar la sensibilidad y especificidad del ensayo, se produjo un anticuerpo monoclonal contra MSA-2c y se desarrolló un ELISA competitivo que es altamente prometedor para el diagnóstico serológico de muestras tanto bovinas como de otros animales que pueden actuar como reservorios de B. bovis.
Babesia bovis is an intraerythrocytic protozoon, transmitted to bovines by Rhipicephalus microplus ticks, that causes important economic losses in vast warm regions of the world. This Thesis was focused on the study of the MSA-2 (Merozoite Surface Antigen-2) protein family of B. bovis, to evaluate their usefulness as vaccine and diagnostic candidates. First, it was found that one member of this family, MSA-2c, contains surface-exposed B-cell epitopes,that are conserved between two Argentine strains, and also, neutralization-sensitive B-cell epitopes. To deepen these observations, predicted amino acid sequences were obtained for MSA-2c and other two members of this family (MSA-2a1 and -2b) from several B. bovis isolates from Argentina, Mexico and USA. B-cell epitopes in highly conserved regions were identified in silico. Synthetic peptides were obtained for four of them and murine anti-sera were produced. All sera reacted with the surface of merozoites of an Argentine and a Mexican strain, indicating that these B-cell epitopes are actually expressed in both parasites. Two of these B-cell epitopes turned out to be neutralization-sensitive and thus, constitute attractive candidates for a multiepitopic vaccine. On the other hand, the presence of anti-MSA-2c antibodies was observed in abundant serum samples of B. bovis-experimentally and naturally-infected bovines. For this reason, its usefulness as diagnostic antigen was explored. An indirect ELISA was developed, that resulted effective for experimental infections, but only partially efficient for field samples. To improve the sensitivity and specificity of the assay, a monoclonal antibody against MSA-2c was produced and a competitive ELISA was developed. This assay is highly promising for the serological diagnosis of samples both from bovines and from other animals that can act as B. bovis reservoires.
Fil: Domínguez, Mariana. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.