Diferenciación de animales vacunados de infectados por el virus de la fiebre aftosa por métodos serológicos - O'Donnell, Vivian K. (1998)
El virus de la Fiebre Afiosa (VFA), un Aftovirus de la familia Picornaviridae, es elagente causal de una enfermedad altamente contagiosa y de tremenda importancia económica,que afecta al ganado de pezuña hendida. La diferenciación entre animales infectados yvacunados así como la detección de animales portadores del virus o “carriers” es esencial paraevaluar la efectividad de campañas de control y erradicación. La detección de anticuerpos (Ac) contra un antígeno (Ag) no estructural asociado con lareplicación del virus, el Ag Asociado a la Infección Viral (Ag VIA), cuyo componenteprincipal es la ARN polimerasa o proteína 3D, altamente conservada entre los diferentesserotipos, ha sido una herramienta útil para monitorear programas de control y erradicación,como un indicador indirecto para la evaluación de la actividad viral a nivel poblacional. Esconocido que vacunas inactivadas contra el VFA pueden inducir Ac contra el Ag VIA, si bienlos niveles de estos Ac son muy bajos y su permanencia mas corta que en animales infectados. Esta respuesta transitoria y variable se atribuye a la presencia de restos de la polimerasa viralen el Ag vacunal, el cual sería antigénico y resultaría en la producción de Ac contra el Ag VIA. El método más ampliamente utilizado para medir Ac contra el Ag VIA es la Inmunodifusión en Agar Gel (IDAG). Este método es simple de realizar, pero su bajasensibilidad y el uso de un Ag parcialmente purificado derivado de cultivos infectados con elvirus, llevó al desarrollo de otras metodologías. Con el objeto de sobrellevar estos inconvenientes, se desarrollaron ensayosinmunológicos capaces de detectar Ac contra proteínas no estructurales del VFA, para laidentificación de animales infectados con el virus. Las proteínas no estructurales, 3D y 2C, se expresaron en Escherichia coli, comoproteínas de fusión a glutation-S-transferasa (GST). Se desarrolló un método de ELISA en fase-líquida (ELISA-3D) capaz de detectar Acespecíficos contra la proteína 3D o RNA polimerasa del VFA. El ELISA-3D, fue capaz dedetectar Ac contra la proteína 3D en suero de bovinos luego de una infección natural oexperimental, desde los 5 días postinfección (dpi) hasta los 565 dpi, mientras que sueros debovinos provenientes de zona libre de Fiebre Aftosa, así como sueros de referencia de bovinosy porcinos infectados con diferentes virus ARN y ADN, fueron negativos, resultando en unaespecificidad del 100%. Los resultados de la comparación del ELISA-3D con la técnica de IDAG y con un ELISA-VIA descripto previamente (Alonso y col., 1990), los que utilizan el Ag VIA semipurificado, mostraron que el ELISA-3D es altamente sensible (95.2 %),específico (100%) y reproducíble (C.V. 2.75 %). Los ensayos en sueros de animalesvacunados, mostraron una respuesta transitoria de Ac inducida por algunas vacunas. La evaluación del método de “Western blot” utilizando como Ag la proteína noestructural 2C, mostró una reacción positiva cuando se analizaron sueros de bovinosinfectados, mientras que sueros de bovinos de zona libre no mostraron ninguna reactividad. Elestudio de sueros de bovinos vacunados mostró 1/79 sueros con reactividad positiva para Accontra 2C. Estos resultados indican que el método de ELISA-3D, es recomendable para serutilizado como método complementario en estudios seroepidemiológicos para monitorearactividad viral. La respuesta de Ac contra 3D inducida por la vacunación en animales con unao dos vacunaciones es transitoria. El aumento en la frecuencia de reacciones positivas luego dela revacunación, indica que para el monitoreo de actividad viral en planes de control bajovacunación, es necesario considerar los parámetros de reacción postvacunal contra 3D parauna mejor interpretación de los resultados obtenidos por éstas técnicas. Finalmente, el uso deproteínas biosintéticas tiene ventajas en su estabilidad y pureza, evita el manejo de virus vivo yprovee una fuente consistente de Ag. La detección de Ac contra otras proteínas noestructurales del VFA, como es el caso de 2C, proveería un mayor grado de confianza en laidentificación de animales infectados con VFA.