Análisis genético de la regulación del almacenamiento de ARNm en cuerpos citoplasmáticos de granos de polen maduro en Arabidopsis thaliana - Scarpin, María Regina (2016)
Se ha descripto que algunos ARNm de polen son sintetizados durante el desarrollo del poleny acumulados en grano de polen maduro deshidratado, para ser traducidos luego de lagerminación del polen. Nuestra hipótesis es que la regulación de la acumulación de estos ARNm de polen pre-sintetizados está mediada por cuerpos citoplasmáticos. Para probar dichahipótesis, analizamos la localización celular de algunos ARNm pre-sintetizados durante eldesarrollo del polen utilizando el sistema MS2-CP. Utilizamos como sistema biológico a Arabidopsis thaliana que permite llevar a cabo un análisis genético, molecular y de desarrollode la expresión específica de genes de polen. Por otro lado, estudiamos gránulos de estrés (SG) y cuerpos de procesamiento (PB) en polen maduro de Arabidopsis como posiblesestructuras celulares donde estos ARNm pre-sintetizados polínicos puedan ser almacenados. En otra línea de estudio, caracterizamos cuerpos de cajal (CB) para investigar si su número ytamaño varían durante los procesos de división celular y diferenciación celular que ocurrenen el desarrollo del grano de polen. Nuestros resultados demuestran la presencia de agregados de ARNm citoplasmáticos enpolen maduro en líneas transgénicas que contienen el sistema MS2-CP. Validamos ycuantificamos estos agregados de ARNm usando un análisis automatizado de MATLAB. Luego verificamos si estos agregados de ARNm co-localizan con gránulos de estrés y/ocuerpos de procesamiento mediante el análisis de líneas transgénicas que expresan el sistema MS2-CP y a la vez proteínas marcadas de SG o PB. Hemos demostrado que uno de cadacinco agregados, aproximadamente, co-localiza con alguna de las proteínas marcadoras de PB, lo que sugiere que los PB son sitios de almacenamiento de los ARNm en granos de polenmaduro. Además, analizamos de qué manera se afecta la presencia y la localización de losagregados citoplasmáticos en ausencia de los genes marcadores de SG y PB. Hemosdeterminado que dichas proteínas serían necesarias para la localización de los ARNm enacúmulos citoplasmáticos. Nuestros resultados además sugieren que los CB respondendurante el desarrollo del polen a las diferentes necesidades fisiológicas de los distintos tiposde células gametofíticas masculinas. Estos resultados contribuirán a entender los mecanismosde regulación transcripcional y traduccional en granos de polen de Arabidopsis thaliana.