Oligonucleótidos inmunomoduladores para el tratamiento de la diabetes tipo 1 : efectos y mecanismo de acción del IMT504 - Gómez Bustillo, Sofía (2024)
La diabetes tipo 1 (DT1) es una enfermedad autoinmune donde las células beta del páncreas son destruidas por células inmunológicas. Actualmente, no existe ninguna intervención clínica efectiva y, por ende, los pacientes deben ser tratados de por vida con insulina. De todas formas, este tratamiento no es suficiente para evitar las complicaciones a largo plazo y, además, la calidad de vida de los pacientes está limitada. Avances en inmunología y regeneración permitieron el desarrollo de nuevos tratamientos, sin embargo, su uso se vio limitado por la necesidad crónica de medicamentos inmunosupresores. Por lo tanto, nuevas estrategias son indispensables para prevenir, tratar y/o curar la DT1. En este contexto, surge el uso de oligonucleótidos (ODNs) inmunomoduladores de la familia PyNTTTTGT. El IMT504, prototipo de esta familia y conocido por sus propiedades regenerativas, ha demostrado reducir los niveles de glucemia en ratones diabéticos no obesos (NOD/LtJ). En este proyecto de tesis, evaluamos el efecto del IMT504 sobre células madre mesenquimales (MSCs) extraídas de médula ósea y células linfoides [linfocitos B (LB) y linfocitos T (LT)] extraídas del bazo, páncreas y nódulos linfáticos drenantes. MSCs y linfocitos de ratones NOD prediabéticos (pre-DT1) y diabéticos (DT1) fueron tratados in vitro con diferentes dosis de IMT504 (entre 0,5 y 20 μg/ml). Además, realizamos ensayos de viabilidad, proliferación y migración en MSCs. Determinamos que dosis bajas del IMT504 estimulan la formación de unidades formadoras de colonias [CFU-F (106 células sembradas/cm2 ): IMT504: 85 vs Control: 65 p<0.05] e inducen la capacidad migratoria (índice migratorio: IMT504: 75 vs Control: 20, p<0.05). El efecto inductor fue detectado con la dosis de 0,5 μg/ml, mientras que dosis mayores a 10,5 μg/ml no generaron diferencias o incluso lograron el efecto contrario. Asimismo, no obtuvimos diferencias significativas en la activación y proliferación de LB de bazo luego del tratamiento con dosis altas de IMT504. Respecto a los LT, utilizamos células aisladas de páncreas o nódulos linfáticos. La población de interés se separó por citometría de flujo y se estimuló in vitro con 0,5 μg/ml de IMT504 o de ODN control. Luego de la estimulación, se midió la actividad y funcionalidad de los linfocitos (inducción de células T reguladoras y expresión de genes por citometría y activación de vías de señalización por qPCR). El IMT504 indujo la producción de TGF-β (p < 0.05 vs control), citoquina que estimula propiedades regenerativas en células madre y en las células β pancreáticas. Además, analizamos las vías de señalización moleculares involucradas en la desregulación de la DT1. Observamos una reducción en los niveles de PI3K (p < 0.01 vs control), mTOR (p < 0.05 vs control) y STAT (p < 0.01 vs control). La disminución en la expresión de estos genes está relacionada con altos niveles del transportador de glucosa 1 (GLUT1), la normoglucemia y la reprogramación celular hacia células tipo β, respectivamente. También observamos que la expresión de MAP3K7, asociada con la destrucción de células β, disminuye (p < 0.05 vs control). En conclusión, nuestros resultados indican que el IMT054 ejerce un efecto sobre las MSCs, que podrían ser partícipes de la regeneración observada y, sobre los LT, de forma de apagar o disminuir la respuesta auto inflamatoria que lleva al establecimiento y desarrollo de la DT1.