Distintas formas moleculares de malato deshidrogenasa en epimastigotes de Trypanosoma cruzi - Reynoso Hunter, Nydia Giselle (1998)
Con el objetivo de conocer las propiedades y características de las malato deshidrogenasas de epirnastigotes de T. cruzi nos propusimos en el presente trabajo, purificar las distintas isoformas presentes en este estadio del parásito. Con tal fin se utilizó, para la isoforma de menor tamaño molecular (MDH1), un procedimiento de purificación que consistió en los siguientes pasos cromatográficos: l) Red-120-Sepharosa 2) CM-Sephadex y 3) Sephacryl 8-200. Para la IVDH de alto peso molecular (MDHZ) luego de la cromatografia en Red 120 —Sepharosa se siguieron a su vez los siguientes pasos: l) Reactive Blue 4-agarosa y 2) Exclusión molecular en Sephacryl S-400 y 8-200. Ambas enzimas se comportaron como bandas únicas de 35 kDa en geles con SDS. Sin embargo, en base a los resultados obtenidos por cromatografia de exclusión molecular es posible suponer que la MDH1 este formando un dímero y la MDH2 sea tetramérica, ya que se pudo determinar para esta última una masa molecular de 160 kDa en su estado nativo. Los estudios cinéticos demostraron que tanto la MDH; como la MDHZpodían utilizar con la misma facilidad el oxalacetato y el NADH como sustratos, obteniéndose para ambos valores cercanos a 50 uM. En cambio sí se observaron diferencias significativas en los valores de Km ap determinados para el malato. Las secuencias de aminoácidos obtenidas a partir del extremo N-terminal de las dos isozirnas mostraron notoria similitud con MDHs de muy diferentes orígenes. En cambio las secuencias de aminoácidos correspondientes a péptidos trípticos de la MDHl presentaron una considerable similitud con MDHs de plantas, si bien la mayor similitud se obtuvo con la isozirna mitocondrial de T. brucei.