Biomarcadores de genotoxicidad en el estudio de la fragilidad genómica en el orden primates - Martinez Montaño, Romari Alejandra (2003)
Existe cada vez más evidencia a favor de la hipótesis de que la inestabilidadgenómica estaría directamente relacionada con la estructura de ciertos loci específicosinvolucrados en rearreglos cromosómicos recurrentes, conocidos como “puntoscalientes". Con la finalidad de establecer si es posible detectar estos “puntos calientes” anivel citogenético, la presente Tesis Doctoral emplea biomarcadores de genotoxicidadcomo manifestación de fragilidad cromosómica inducida por agentes químicos. Paraello, se trabajó con dos modelos: Cebus apella (CAP) y Homo sapiens (HSA), unsistema experimental como los linfocitos de sangre periférica (LSP) y un agentequímico inductor como el metronidazol (MTZ). Cebus apella (CAP) es un Primate del Nuevo Mundo, ampliamente utilizadocomo modelo experimental en diferentes áreas de la biomedicina que, hasta el presente,poco había sido analizado en cuanto a su utilidad en estudios de genotoxicidadempleando agentes químicos. El Metronidazol (MTZ) es un derivado 5-nitroimidazólicoconsiderado un agente genotóxico en sistemas in vivo e in vitro. En elpresente trabajo de Tesis Doctoral, se utilizaron distintas concentraciones de MTZ encultivos de linfocitos de sangre periférica (LSP) de Cebus apella y de humanos (HSA),con la finalidad de evaluar su potencial mutagénico sobre los genomas de ambasespecies, por separado y a nivel intergenómico, realizando un análisis de las frecuenciasde ICH y ACG a nivel de banda cromosómica, utilizando una técnica de Bandas G (Tinción Wright)-ICH secuencial puesta a punto en el marco de esta Tesis. Los resultados se analizaron en un nivel genómico general, para los cuatrobiomarcadores empleados (Índice Mitótico —IM-, Índice de Replicacíón —IR-, Intercambio de Cromátides Hermanas —ICH- y Aberraciones Cromosómicas Incluyendo Gaps. —ACG-), empleando un diseño en bloques al azar (DBA) y un ANOVA de dosvías para CAP y para HSA. A nivel genómico sitio específico, se analizaron lasfrecuencias para dos biomarcadores (ICH y ACG) por cromosoma, brazo y bandacromosómica, utilizando una Chi cuadrado, considerando siempre como frecuenciaesperada la correspondiente al control de diseño (sin el agregado de droga). A nivelintergenómico se utilizó la prueba U-Mann Whitney para el análisis de las frecuenciasmedias entre CAP y HSA. Se realizó una tabla de 41 puntos de homeología, según laliteratura, que se completó con la información de las frecuencias de ICH y de ACG endichos puntos para CAP y HSA realizando el análisis mediante el coeficiente de Spearman. El MTZ genera una disminución del IM y un aumento de los ICH por célula ylas ACG por célula en cultivos de LSP de Cebus apella y de Homo sapiens, conrespecto al control de diseño. Para ambas especies, el IR no se ve afectado por lapresencia de MTZ en las concentraciones utilizadas en el presente estudio. Lospromedios generales para los cuatro biomarcadores no mostraron diferenciasestadísticamente significativas entre CAP y HSA. Este hallazgo es coherente con unaconservación genómica de más del 80%. La ausencia de relación entre los ICH y las ACG por cromosoma y el tamaño o la morfología cromosómicos, junto a unaconcentración de ambos biomarcadores en un conjunto de bandas, indicaría la noaleatoriedad en la distribución de la fragilidad genómica, junto a una conservación de lainformación en los segmentos homeólogos entre ambos genomas. Encontramos bandas con elevadas frecuencias de ICH y/o ACG en todos loscasos, es decir, puntos con una elevada “inestabilidad genómica basal”, y bandas conbajas o nulas frecuencias (de ICH y/o ACG) para el control de diseño, con diferenciasestadísticamente significativas al agregar MTZ al cultivo. La mayoría de estas bandascontienen secuencias que han sido calificadas como indicadoras de inestabilidadgenómica, o son consideradas Sitios Frágiles. Los hallazgos del presente trabajo representarían evidencias citogenéticas de lano aleatoriedad en la distribución de la fragilidad genómica en Primates, y de suconservación a nivel evolutivo.